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ainim

金虫 (小有名气)

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[求助] C18柱压过高。。。

求助各位亲，用watersC18柱，常温检测，流动相是20%乙腈80%磷酸缓冲液，1ml/min，前几次做的时候还好，这次做的柱压一下子高了起来，都超过设定上限4000psi了，以前只有1700psi左右，我先用纯甲醇冲0.5ml/min，压力下降到600psi，换成50%甲醇50%纯水，结果半个多小时后柱压又到2000多了（1ml/min则为4000多），换了纯水源再试结果还是这样，再换成纯甲醇一会儿压力又下降到600，如此循环。。。（开始怀疑是水的问题，换了两次水源，每次都用有机膜抽滤两次，结果还是不行）求救哇求救哇。。。

[ Last edited by ainim on 2013-4-25 at 14:36 ]

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刘涛...

1楼 2013-04-25 14:34:40

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cucucmlar

银虫 (小有名气)

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专业: 色谱分析

【答案】应助回帖

★
ainim: 金币+1 2013-05-08 09:47:59

引用回帖:

8楼: Originally posted by ainim at 2013-04-26 11:06:27
这不是我平常的循环方式，我平常做完后用90%水10%甲醇一个半小时，50%甲醇一个半小时，纯甲醇1小时，都是1ml/min。我这次纯甲醇和50%甲醇循环冲是因为我奇怪为什么用纯甲醇把柱压冲下来以后换成50%甲醇冲，柱压怎么 ...

首先纯甲醇冲洗色谱柱的时候，柱压肯定是会比甲醇水或甲醇缓冲盐冲洗柱子的时候压力低的啊，你用纯甲醇冲柱子压力低了不代表那会你的柱子就不堵了，也不代表柱子压力就下来了，另外，50%的甲醇和50%水这个比例刚好是甲醇水溶液粘度最大的时候的比例，所以一般用50-60%甲醇水溶液冲洗柱子的时候，柱压是最大的，当甲醇比例再减小，柱压又会降低，所以，甲醇水溶液比例不一样，柱压肯定也会不一样。你现在的问题估计是做完实验后缓冲盐冲的不够干净，或者是样品中含盐量太高没有冲洗干净，现在要彻底冲洗色谱柱，可以设置95%的水和5%的甲醇溶液，0.2~0.5mL/min的流速冲洗过夜或冲上十几二十小时。