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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物无条带？
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jkamm

金虫 (正式写手)

[求助] PCR产物无条带？

我做DNA电泳有条带（见图），但PCR产物电泳不有条带，找不到原因，求救。
30UL体系：Taq buffer(Mg2+)  3ul
                    dNTPs (2.5mM) 2.4ul
                     上游引物(20um/L)    1.2ul
                    下游引物 (20um/L)    1.2ul
                   ddH2O     22.1ul
                    Taq 酶  0.3U
                   DNA 模版 1.2ul

Z4 B1-G3 2013-04-24 20 小时 53 分钟.jpg
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1楼 2013-04-24 23:25:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by jkamm at 2013-04-25 09:06:57
模版问题？是太低了还是高了还是。。请指导下新手。

模板太多了，从胶上看，你的模板感觉至少是几微克，因为没有marker，不是特别准确。我觉得你应该稀释模板10-100倍P。
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12楼2013-04-26 09:03:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jkamm(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-25 16:55:08
你的DNA模板电泳时点了多少微升？感觉你的模板浓度不小，做PCR应该稀释后使用。
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2楼2013-04-25 01:34:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

此外，你可以检查是不是退火温度不合适，目的片段大小多少，PCR延伸时间是否够。
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3楼2013-04-25 01:39:50
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jkamm

金虫 (正式写手)
想着可能模版问题，不知是什么。DNA上样5ul，最左边一个样是PCR结果较好的DNA对照，这个体系我已将引物减半了，模版没减。
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4楼2013-04-25 08:34:24
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