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shelly9018

新虫 (小有名气)

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虫号: 1340207
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性别: MM
专业: 环境微生物学

[交流] 可以用什么分子技术，分析环境中微生物群体的数量啊，如底泥的微生物数量的变化已有5人参与

如题，想做底泥中细菌数量的变化，能够用什么分子技术来实行比较好的定量呢，是不是RT-PCR可以呢，那它是怎样做的，也是针对16rRNA基因的数量拷贝来分析的嘛?望大家提供宝贵意见和经验！

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1楼 2013-04-24 16:45:17

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cz200717

铜虫 (正式写手)

应助: 35 (小学生)
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专业: 环境微生物学

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-24 21:10:48

貌似RFLP、DGGE和RT-PCR都可以吧！

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2楼2013-04-24 18:58:44

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闲花落地

铜虫 (初入文坛)

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laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2013-04-24 21:11:16

可以通过绝对定量PCR,即RT-PCR进行定量检测，不过做之前要制备对应检测基因的标准品
另一种做法是半定量法，将对应基因缺失一部分制成内标，制备成不同梯度的内标样品，将土壤DNA和不同浓度内标样品混合，PCR扩增目的基因，比较2个模板竞争性PCR产物的亮弱，亮度相同的结果即可定量待测土壤中微生物的量。
16S rRNA基因定量结果不是最终的微生物数量，需要除以3.4，因为不同微生物16S rRNA基因的拷贝数不同，平均值在3.4左右。

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3楼2013-04-24 19:50:46

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