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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 可以用什么分子技术，分析环境中微生物群体的数量啊，如底泥的微生物数量的变化
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shelly9018

新虫 (小有名气)

[交流] 可以用什么分子技术，分析环境中微生物群体的数量啊，如底泥的微生物数量的变化 已有5人参与

如题，想做底泥中细菌数量的变化，能够用什么分子技术来实行比较好的定量呢，是不是RT-PCR可以呢，那它是怎样做的，也是针对16rRNA基因的数量拷贝来分析的嘛?望大家提供宝贵意见和经验！
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1楼 2013-04-24 16:45:17
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cz200717

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-24 21:10:48
貌似RFLP、DGGE和RT-PCR都可以吧！
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2楼2013-04-24 18:58:44
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闲花落地

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2013-04-24 21:11:16
可以通过绝对定量PCR,即RT-PCR进行定量检测，不过做之前要制备对应检测基因的标准品
另一种做法是半定量法，将对应基因缺失一部分制成内标，制备成不同梯度的内标样品，将土壤DNA和不同浓度内标样品混合，PCR扩增目的基因，比较2个模板竞争性PCR产物的亮弱，亮度相同的结果即可定量待测土壤中微生物的量。
16S rRNA基因定量结果不是最终的微生物数量，需要除以3.4，因为不同微生物16S rRNA基因的拷贝数不同，平均值在3.4左右。
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3楼2013-04-24 19:50:46
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kiruwa

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
qPCR就可以了，不用搞的那么复杂。
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请注意,照片不是我本人!!!请不要把此人和我的长相联系到一起去.
4楼2013-04-24 21:09:23
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kiruwa

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cz200717 at 2013-04-24 18:58:44
貌似RFLP、DGGE和RT-PCR都可以吧！

RFLP过时了 DGGE不能定量。
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请注意,照片不是我本人!!!请不要把此人和我的长相联系到一起去.
5楼2013-04-24 21:10:14
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zhanqgao

禁虫 (知名作家)
本帖内容被屏蔽
6楼2013-04-25 08:35:33
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
当然首推 QPCR绝对定量了.
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7楼2013-04-25 08:44:46
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