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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？
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longyh6411

金虫 (小有名气)

[求助] 载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？

载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？我没别的选择了，只能选挨着的
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1楼 2013-04-23 21:25:47
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呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cory0931 at 2013-04-26 17:37:15
on yr re:
质粒的两个酶切位点，紧挨着的话，势必会影响双酶切效果，原因是：
内切酶结合时，一般都是需要微点周围有多余碱基，否则影响结合；
再者，酶切后的粘性末端不余怒重合；
若是连个酶切位点之间有几个 ...

麻烦问下，那两条引物上连的所需酶切位点的序列的跟质粒上所标注的酶切位点的顺序有关吗？
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12楼2013-12-11 09:10:39
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-04-24 20:20:08
这的看具体情况，一般来说，不建议用紧邻的两个酶切位点，可能影响其中一个的酶切效率。但也需要具体情况来分析，如果可能，将你的具体序列发上来，大家帮你分析
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2楼2013-04-23 21:46:31
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-04-23 21:58:19
什么酶切位点？把序列发上来。
做是可以，不过建议酶切后用CIAP处理，以防止里面的单酶切片段自连。
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3楼2013-04-23 21:54:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-24 20:20:22
要根据距离和哪种限制酶的情况而定。有些能切开，有些不行。
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4楼2013-04-24 03:59:14
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