求解读此PCR 为何如此不堪入目 - 分子生物 - 综合其他 - 第3页小木虫论坛-学术科研互动平台

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会飞的害虫

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如果PCR反应体系及引物没有问题，可以从模板找找原因。

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不是没有，而是你看不见。

21楼2013-04-24 11:52:27

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渭水凡夫

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15楼: Originally posted by 李泽豪 at 2013-04-24 08:55:09
10×Buffer          2uL
   dNTPs             1.5uL
   上游引物    0.6uL
   下游引物    0.6uL
   rTaq                0.5uL
   cDNA             1.5（2)uL
   ddH2O ...

你把引物降到0.3ul模板为2ul 再跑跑

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平静的水和不叫的狗是最可怕的

22楼2013-04-24 19:20:24

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chenyuqin

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第一张感觉是胶有问题，制胶的时候可以多沸几次，还有检查一下你的缓冲液是不是时间太久，也会造成胶的融化出现弥散的。感觉你的DNA有严重的蛋白污染呀

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where there is a will,there ia a way.

23楼2013-04-24 19:52:20

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alicelchf

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你这显然没有目标带的节奏嘛！

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修身、齐家、治国、平天下

24楼2013-04-24 20:27:06

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李泽豪

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22楼: Originally posted by 渭水凡夫 at 2013-04-24 19:20:24
你把引物降到0.3ul模板为2ul 再跑跑...

嗯，好的，谢谢指教

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25楼2013-04-24 20:59:28

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李泽豪

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23楼: Originally posted by chenyuqin at 2013-04-24 19:52:20
第一张感觉是胶有问题，制胶的时候可以多沸几次，还有检查一下你的缓冲液是不是时间太久，也会造成胶的融化出现弥散的。感觉你的DNA有严重的蛋白污染呀

我用的EB染料

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26楼2013-04-24 20:59:49

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李泽豪

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20楼: Originally posted by teruisi at 2013-04-24 11:30:49
引物加太多了亲或者引物设计不合理...

谢谢

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27楼2013-04-24 21:01:32

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李泽豪

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19楼: Originally posted by 天煞孤星A at 2013-04-24 11:07:45
调一下模板电压感光度量少点跑跑试试了。

嗯，我在试试

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28楼2013-04-24 21:01:44

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biology-girl

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亲啊，你这个情况，据我的经验判断，不是模版的问题了，而是体系少加了东西。。我也有这种情况的，木事，重做吧。如果你真的担心是模版问题。。就再单独点个dna的胶呗。。杂质太多的话，就稀释一下再P就好了呀。。。反正，我认为。。。体系有问题。

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29楼2013-04-24 21:13:05

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yilunanxia

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好多引物二聚体啊

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30楼2013-04-25 08:45:09

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