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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解读此PCR 为何如此不堪入目
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 蓝慧 at 2013-04-23 18:06:40
有点marker吗？如果点了的话，marker应该有的，感觉没看到呢。如果marker都没有跑出来，可能是胶出问题了

如果是胶的问题   怎么解释  求教？？？
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
11楼2013-04-23 23:44:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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8楼: Originally posted by 渭水凡夫 at 2013-04-23 23:39:10
是血浆DNA和血清DNA...

引物二聚体很多，你要的带是多大的？模板最好大致定量，PCR的模板过多或者过少都会影响结果。
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12楼2013-04-24 03:25:10
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李泽豪

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-04-23 21:52:39
我怎么感觉有些还跑得不错？
照片拍得太难看了。把iso降低，同时提高曝光时间，慢慢试试，直到拍出好的照片。...

和摄像头有关吗？
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13楼2013-04-24 08:40:35
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李泽豪

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by dajiong at 2013-04-23 23:17:54
亲，你的引物二聚体太严重。。。你应该考虑一下引物设计的合不合理。会不会引物之间的配对太强。以及反应体系稍微调整一下吧。。要不要退火温度提高两度试试。...

这个引物别人跑了好多次，都没问题！和引物反复冻融有关吗？
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14楼2013-04-24 08:42:19
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李泽豪

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 渭水凡夫 at 2013-04-23 23:41:36
引物两是不是加多了  你把你的PCR体系 发上来 see see   再一个 就是引物设计有问题...

10×Buffer           2uL
      dNTPs               1.5uL
      上游引物       0.6uL
      下游引物       0.6uL
       rTaq                 0.5uL
       cDNA                1.5（2)uL
     ddH2O              13.3（12.8）uL
  action    94℃变性45s     55℃退火45s    72℃延伸1min    共30个循环  最后一个循环后 72℃延伸10min
  HMGB1   94℃变性45s     55℃退火45s    72℃延伸1min    共30个循环  最后一个循环后 72℃延伸10min
Bax/Bcl2   94℃变性15s     55℃退火30s    72℃延伸30s    共35个循环  最后一个循环后 72℃延伸7min

以上是我的反应体系，基因和图片是对应的
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15楼2013-04-24 08:55:09
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李泽豪

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 渭水凡夫 at 2013-04-23 23:41:36
引物两是不是加多了  你把你的PCR体系 发上来 see see   再一个 就是引物设计有问题...

引物设计应该不会有问题的，这几个基因好多人都做过，已经很成熟了
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16楼2013-04-24 08:57:11
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李泽豪

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 渭水凡夫 at 2013-04-23 23:41:36
引物两是不是加多了  你把你的PCR体系 发上来 see see   再一个 就是引物设计有问题...

做的胶有问题吗？
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17楼2013-04-24 08:59:11
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蓝慧

木虫 (正式写手)
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11楼: Originally posted by 渭水凡夫 at 2013-04-24 00:44:16
如果是胶的问题   怎么解释  求教？？？...

可能胶本身有问题，或者是核酸染料有问题。如果Marker都有问题，一般都是胶的问题。
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向着目标前进！
18楼2013-04-24 10:50:54
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天煞孤星A

铁杆木虫 (职业作家)
★
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调一下模板  电压  感光度 量少点跑跑  试试了。
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19楼2013-04-24 11:07:45
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teruisi

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 李泽豪 at 2013-04-23 21:46:39
楼上的各位大神，我刚开始做PCR，也出现了很头疼的问题，p了好多次，都没跑好，不知道是什么原因，求各位指点！

2012-10-28 bcl2a.jpg

2013hr 40min.jpg

actin 2013-2-28 12hr 1  150mint.jpg

actin 2013-3-3 1 ...

引物加太多了亲 或者引物设计不合理
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20楼2013-04-24 11:30:49
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