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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌落计数那叫一个烂啊
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颜英

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌落计数那叫一个烂啊

各位大侠们，我来求救啊
我在做沙门氏菌菌落计数，每次到平板之前，都会将养的菌离心，沉淀再用灭菌生理盐水重新悬浮，然后测OD600，使吸光度为0.4，再梯度稀释，梯度稀释按照微生物学教程做的，稀释完后，取200μl加入培养皿中，倒入培养基，混匀后培养。
我数板子的时候，快崩溃了，10-6到10-9基本没有差别，别说1000被，连个3倍都没有，每个板子的菌落数都在300以内，只是有的时候二三十，有的时候二三百，但是就是没有梯度，问题出在哪，求高手解答，跪谢啊
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1楼 2013-04-18 09:14:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

无语之

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励新虫 2013-04-20 11:17:36
稀释的时候枪头有换吗？涂布的时候涂布器有烧吗？
如果确实操作规范的话那这就是正常现象了 菌落计数常常就不是正好的10的倍数 本科做的细菌菌落总数的测定实验里有个报告规则 LZ可以参考一下一些实验书籍
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4楼2013-04-18 09:43:03
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_小小鸟

金虫 (正式写手)

御林军

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-04-18 22:00:58
颜英: 金币+5 2013-04-18 22:13:19
菌落计数是整个计数方法里工作量最大的一种方法，楼主可以同时用几种方法佐证你的实验结果。但是无论是哪种方法都要做到样品在稀释和转移时要混匀，震荡30S以上，不然菌体是不会均匀分布在液体中的（做过实验）。同时用OD值，血球计数板，和菌落计数法对比一下结果就知道了。楼主也可以把浓度最小的再稀释1~2个梯度看看，应该可以找到答案。
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一米阳光照大地。。。
5楼2013-04-18 11:32:00
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普通回帖

zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖 2013-04-20 11:17:07
按楼主描述的情况，过程没有错，挑不出毛病
重复一遍试试，说不定是偶然失误造成的
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IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
2楼2013-04-18 09:17:47
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颜英

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangxingc at 2013-04-18 09:17:47
按楼主描述的情况，过程没有错，挑不出毛病
重复一遍试试，说不定是偶然失误造成的

我已经做了很多次了
问题出在哪，问题出在哪，问题出在哪，问题出在哪，。。。。
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3楼2013-04-18 09:19:40
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zhangchao3206

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖 2013-04-20 11:17:59
存在两方面的问题，1.菌浓稀释问题，建议用玻璃吸管，不要用移液枪。2.采用平板倾注法，基内培养。
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6楼2013-04-18 11:40:42
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xiyang139

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 鼓励新虫 2013-04-20 11:18:12
可能浓度还是太高 再稀释下
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宝剑锋从磨砺出
7楼2013-04-18 12:11:36
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lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖 2013-04-20 11:18:06
1. 同意楼上的，每稀释一次一定要充分混匀。
2. 为什么是先把菌液加到培养皿里，再倒入培养基啊？这样能容易均匀吗？为什么不是涂布平板啊？

涂布的时候从低到高涂。
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8楼2013-04-18 12:43:51
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devil小斌

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
实在不行就用血球计数板吧！！计数的，用涂板的话误差很大，别人说是用浇柱平板法好像更好一点~
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人活争口气~
9楼2013-04-18 18:39:12
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莹莹陀zws

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖 2013-04-20 11:18:19
楼主照你这样说的话，我觉得污染的可能性比较大，我刚开始做计数时，稀释的肉汤都长菌了还在接着用，怎么稀释都长得特多
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悲伤着你的悲伤，幸福着你的幸福
10楼2013-04-18 20:01:13
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