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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 胶原蛋白的提取，我综合的一个方案，麻烦大家看看，我有些疑问额。
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许老板

金虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-20 17:57:28
盐析到2.6M之后就没有盐析了呀 ，1%的乙酸溶解就是为了透析了...

加到2.6M没有沉淀出来，，，，，，都是溶液
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21楼2013-05-20 18:26:23
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许老板

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by fool_proof at 2013-04-17 17:57:24
我们的做法是：胶原提取物初步盐析后的沉淀，加入tris中性液中（tris=0.1M，NaCl=1.0M, pH=7.2~7.6），搅拌使沉淀溶解，再加NaCl至浓度为1.7M进行盐析。离心取上清，加入NaCl至最终浓度为2.6M。再次离心取沉淀溶于 ...

你的这一步完成以后就直接进行透析了吧？还是要加NaOH什么的啊，我当时看了你的这个之后吧我的方案改成了这样：
实验步骤：
1,猪皮的前处理：
（1）称取猪皮50g，用氯仿/乙醇（2:1，A）溶液对其进行脱脂后切除皮下脂肪，去毛并细切；
（2）将组织小块用乙醇和蒸馏水洗涤多次；
（3）将洗涤后的组织放入搅拌机中搅拌成糊状，用含4.5mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.5，E）充分洗涤（2h）以去除脂质及血清等成分，低温离心（8000r/min，30min，4℃）取沉淀。

2,提取胶原蛋白：
（1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h；
（2） 高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。在上清液中加入NaCl至4.4mol/L（NaCl2.2mol）搅拌过夜；
（3）低温离心，在沉淀中加入Tris中性液（F）搅拌使沉淀溶解，再加入NaCl至浓度为1.7M进行盐析，离心取上清液，加入NaCl至最终浓度为2.6M，离心取沉淀，溶于1%的乙酸(D)，4℃下静置过夜，最后得到的上清液即为胶原粗提液。

3,胶原蛋白提纯:
（1）在粗提胶原蛋白溶液缓慢加入6 mol/L NaOH溶液（C）调节pH值到6，冷冻离心除掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体研细粉末，缓慢搅拌，4 ℃静置过夜保存；
（2）离心取沉淀，用稀醋酸再次溶解，将溶解液装入透析袋中，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液；
（3）将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。



————特别是第2（3）到后面的3，是不是有问题啊，我刚刚发现，我觉得照你的意思应该是这样的，你看对不对。
前面的一致，从2开始
2,提取胶原蛋白：
（1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h；
（2） 高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。在上清液中加入NaCl至4.4mol/L（NaCl2.2mol）搅拌过夜；
（3）低温离心，在沉淀中加入Tris中性液（F）搅拌使沉淀溶解，再加入NaCl至浓度为1.7M进行盐析，离心取上清液，加入NaCl至最终浓度为2.6M，离心取沉淀，溶于1%的乙酸(D)，4℃下静置过夜。
3，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液。将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。



————一定要看看，谢谢了，现在实验失败，焦头烂额的
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22楼2013-05-20 19:08:14
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
红舟流星: 金币+2, 应助指数+1, 欢迎来生物材料板块积极应助交流 2013-05-20 23:04:19
3（1）和2（2）的作用是相同的，所以你在后续的步骤中得不到胶原沉淀了，原因是你把胶原沉淀扔掉了。所以3（1）可以不要了。
另外应该先切刮除脂肪层，切成小块后脱脂，这样脱脂的效率更高。
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渴望旅游
23楼2013-05-20 20:27:17
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白玉龙

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问一下，2（3）中，沉淀在Tris中性液中溶解，然后1.7M NaCl盐析，离心取上清液，那弃掉的沉淀是什么？我也在尝试着提取胶原呢。
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SoEasy！
24楼2013-05-27 22:23:33
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许老板

金虫 (小有名气)
★
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块积极交流 2013-05-28 07:12:55
引用回帖:
24楼: Originally posted by 白玉龙 at 2013-05-27 22:23:33
请问一下，2（3）中，沉淀在Tris中性液中溶解，然后1.7M NaCl盐析，离心取上清液，那弃掉的沉淀是什么？我也在尝试着提取胶原呢。

之前有人回复过了，沉淀的是Ⅲ型胶原，
我也是刚刚做，哈哈多多交流~~
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25楼2013-05-27 23:00:51
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施莱登

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
25楼: Originally posted by 许老板 at 2013-05-27 23:00:51
之前有人回复过了，沉淀的是Ⅲ型胶原，
我也是刚刚做，哈哈多多交流~~...

前辈的胶原做的怎么样？
我现在也是啥也不懂。想请教些经验。
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26楼2015-09-24 10:33:30
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许老板

金虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by 施莱登 at 2015-09-24 10:33:30
前辈的胶原做的怎么样？
我现在也是啥也不懂。想请教些经验。...

后来因为一些原因没做了，不过方案基本是摸清楚了
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27楼2015-09-24 14:04:24
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soulfung

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
28楼2017-06-29 20:03:39
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