胶原蛋白的提取，我综合的一个方案，麻烦大家看看，我有些疑问额。 - 生物材料 - 天然生物材料

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许老板

金虫 (小有名气)

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专业: 生物医用高分子材料

引用回帖:

20楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-20 17:57:28
盐析到2.6M之后就没有盐析了呀，1%的乙酸溶解就是为了透析了...

加到2.6M没有沉淀出来，，，，，，都是溶液

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21楼2013-05-20 18:26:23

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许老板

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引用回帖:

7楼: Originally posted by fool_proof at 2013-04-17 17:57:24
我们的做法是：胶原提取物初步盐析后的沉淀，加入tris中性液中（tris=0.1M，NaCl=1.0M, pH=7.2~7.6），搅拌使沉淀溶解，再加NaCl至浓度为1.7M进行盐析。离心取上清，加入NaCl至最终浓度为2.6M。再次离心取沉淀溶于 ...

你的这一步完成以后就直接进行透析了吧？还是要加NaOH什么的啊，我当时看了你的这个之后吧我的方案改成了这样：
实验步骤：
1,猪皮的前处理：
（1）称取猪皮50g，用氯仿/乙醇（2:1，A）溶液对其进行脱脂后切除皮下脂肪，去毛并细切；
（2）将组织小块用乙醇和蒸馏水洗涤多次；
（3）将洗涤后的组织放入搅拌机中搅拌成糊状，用含4.5mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.5，E）充分洗涤（2h）以去除脂质及血清等成分，低温离心（8000r/min，30min，4℃）取沉淀。

2,提取胶原蛋白：
（1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h；
（2）高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。在上清液中加入NaCl至4.4mol/L（NaCl2.2mol）搅拌过夜；
（3）低温离心，在沉淀中加入Tris中性液（F）搅拌使沉淀溶解，再加入NaCl至浓度为1.7M进行盐析，离心取上清液，加入NaCl至最终浓度为2.6M，离心取沉淀，溶于1%的乙酸(D)，4℃下静置过夜，最后得到的上清液即为胶原粗提液。

3,胶原蛋白提纯:
（1）在粗提胶原蛋白溶液缓慢加入6 mol/L NaOH溶液（C）调节pH值到6，冷冻离心除掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体研细粉末，缓慢搅拌，4 ℃静置过夜保存；
（2）离心取沉淀，用稀醋酸再次溶解，将溶解液装入透析袋中，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液；
（3）将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。

————特别是第2（3）到后面的3，是不是有问题啊，我刚刚发现，我觉得照你的意思应该是这样的，你看对不对。
前面的一致，从2开始
2,提取胶原蛋白：
（1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h；
（2）高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。在上清液中加入NaCl至4.4mol/L（NaCl2.2mol）搅拌过夜；
（3）低温离心，在沉淀中加入Tris中性液（F）搅拌使沉淀溶解，再加入NaCl至浓度为1.7M进行盐析，离心取上清液，加入NaCl至最终浓度为2.6M，离心取沉淀，溶于1%的乙酸(D)，4℃下静置过夜。
3，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液。将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。

————一定要看看，谢谢了，现在实验失败，焦头烂额的