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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 胶原蛋白的提取，我综合的一个方案，麻烦大家看看，我有些疑问额。
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许老板

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by fool_proof at 2013-04-17 19:22:19
我前后的回复一起看吧，具体的时间需要你自己摸索。你这方案在盐析纯化这一步，我觉得弄反了。还有一点，6 mol/L NaOH溶液（C）调节pH值到7，胶原也肯能沉淀出来。猪龄的大小对工艺影响很大，胎牛皮或者新生牛皮最 ...

胶原蛋白透析，老师说要看透析需要的分子量来处理透析袋，我在网上查了下，方案里面都没有这方面的说明，求助求助啊！！
还有胃蛋白酶处理之后，加氯化钠至4.4mol/L，就像凝胶一样，这种状态对不对啊，下一步离心都不好处理了额。
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11楼2013-05-17 10:45:05
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-05-17 20:11:29
引用回帖:
11楼: Originally posted by 许老板 at 2013-05-17 10:45:05
胶原蛋白透析，老师说要看透析需要的分子量来处理透析袋，我在网上查了下，方案里面都没有这方面的说明，求助求助啊！！
还有胃蛋白酶处理之后，加氯化钠至4.4mol/L，就像凝胶一样，这种状态对不对啊，下一步离心 ...

一般都是8000~14000的透析袋
凝胶状有点不正常，盐析一般都是有沉淀的，剩下的是水溶液。
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渴望旅游
12楼2013-05-17 14:02:19
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许老板

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-17 14:02:19
一般都是8000~14000的透析袋
凝胶状有点不正常，盐析一般都是有沉淀的，剩下的是水溶液。...

粉末状的沉淀吗？前一步提取之后离心的上清就是比较稠的溶液，我是直接加的nacl固体，然后就像胶一样了。

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13楼2013-05-17 18:43:18
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许老板

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-17 14:02:19
一般都是8000~14000的透析袋
凝胶状有点不正常，盐析一般都是有沉淀的，剩下的是水溶液。...

加NaCl到4.4M以后就成了烧杯里面那样，离心我用了4℃ 8000r/min 15min 一次没效果，两次就是离心管的那样了。是不是因为猪皮前期处理脂肪没除干净啊？在用胃蛋白酶提取时也是浑浊的稠液。

IMAG0943.jpg



IMAG0944.jpg



IMAG0945.jpg
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14楼2013-05-17 23:50:35
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许老板

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-17 14:02:19
一般都是8000~14000的透析袋
凝胶状有点不正常，盐析一般都是有沉淀的，剩下的是水溶液。...

回复一下我把
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15楼2013-05-18 23:24:48
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
红舟流星: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-05-19 23:58:14
引用回帖:
15楼: Originally posted by 许老板 at 2013-05-18 23:24:48
回复一下我把...

转速提高下试试，看离心管的情况是离心力不够
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渴望旅游
16楼2013-05-19 20:20:13
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许老板

金虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-19 20:20:13
转速提高下试试，看离心管的情况是离心力不够...

老师也是这样说的  我加到了12000   勉强弄出来了，，，现在又有新问题了，，
我是照你的方案来的：加入tris中性液中（tris=0.1M，NaCl=1.0M, pH=7.2~7.6），搅拌使沉淀溶解，再加NaCl至浓度为1.7M进行盐析。离心取上清，加入NaCl至最终浓度为2.6M。再次离心取沉淀溶于1%的乙酸中，4℃下静置过夜。  tris中性液ph=7.40   沉淀溶解不明显，，，，然后我想了下  溶多少算多少吧，，，然后就离心取上清了，，，，现在加NaCl，，，没有沉淀出来
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17楼2013-05-19 23:22:13
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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17楼: Originally posted by 许老板 at 2013-05-19 23:22:13
老师也是这样说的  我加到了12000   勉强弄出来了，，，现在又有新问题了，，
我是照你的方案来的：加入tris中性液中（tris=0.1M，NaCl=1.0M, pH=7.2~7.6），搅拌使沉淀溶解，再加NaCl至浓度为1.7M进 ...

1%的乙酸中静置很难溶解的，需要搅拌
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渴望旅游
18楼2013-05-20 08:18:16
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许老板

金虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by fool_proof at 2013-05-20 08:18:16
1%的乙酸中静置很难溶解的，需要搅拌...

我还没有到那一步有，上一步没有沉淀出来啊，

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19楼2013-05-20 13:42:44
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fool_proof

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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19楼: Originally posted by 许老板 at 2013-05-20 13:42:44
我还没有到那一步有，上一步没有沉淀出来啊，
...

盐析到2.6M之后就没有盐析了呀 ，1%的乙酸溶解就是为了透析了
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渴望旅游
20楼2013-05-20 17:57:28
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