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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 糖肽（肽含量很少）用β消除法分离糖链和肽段后，怎么测定该反应已经完全反应了？
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亚米岛

铜虫 (初入文坛)

[求助] 糖肽（肽含量很少）用β消除法分离糖链和肽段后，怎么测定该反应已经完全反应了？

本人想鉴定糖肽中是否只有O连接，用β消除法分离糖链和肽段后，怎么测定该反应已经完全反应了？求指教
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1楼 2013-04-16 14:26:28
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
lz说的是β-消除-马氏加成（BEMAD）方法吧。该方法O-连接糖修饰的Thr和Ser会发生β-消除反应，在α碳和侧链原子之间形成双键，二硫苏糖醇（DTT）打开双键并与硫醇形成二硫键，进一步通过硫醇亲和柱富集糖修饰的蛋白。不知道lz是想检测什么，如果仅仅是检测O连糖有无，那反应不完全应该问题也不大。如果是想鉴定位点，那反应完全肯定是最好的。lz可以参考复旦大学一个博士论文（作者名字忘了，你可以查一下），这个人BEMAD摸了多种方法，可能会涉及到相关反应完全与否的检测。
ps,如果想测定o连糖，可以尝试pngase F酶切除N连接糖（绝大部分），再用凝集素做富集，LC-MS/MS检测，如果lz还有时间有材料去重复这个实验的话。
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2楼2013-04-17 10:53:09
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亚米岛

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-17 10:53:09
lz说的是β-消除-马氏加成（BEMAD）方法吧。该方法O-连接糖修饰的Thr和Ser会发生β-消除反应，在α碳和侧链原子之间形成双键，二硫苏糖醇（DTT）打开双键并与硫醇形成二硫键，进一步通过硫醇亲和柱富集糖修饰的蛋白 ...

我想把糖链上的肽段除掉，再继续做反应，现在在确定糖肽键型，估计是只有只有O连接，请问你还记得那个论文大概是叫什么吗？我没有搜索到，麻烦你了
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3楼2013-04-17 21:53:26
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 亚米岛 at 2013-04-17 21:53:26
我想把糖链上的肽段除掉，再继续做反应，现在在确定糖肽键型，估计是只有只有O连接，请问你还记得那个论文大概是叫什么吗？我没有搜索到，麻烦你了...

加到附件了。
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4楼2013-04-19 13:23:45
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亚米岛

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-19 13:23:45
加到附件了。...

多谢啦，可是怎么送你金币呢
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5楼2013-04-21 19:18:57
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

内容已删除
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6楼2013-04-21 19:38:11
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 亚米岛 at 2013-04-21 19:18:57
多谢啦，可是怎么送你金币呢...

能帮上忙就好！
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7楼2013-04-22 11:11:36
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-22 11:11:36
能帮上忙就好！...

今天看到一篇文章（cell host & micorbe杂志），有检测O-连糖BEMAD完成情况的，P483右下页。看起来貌似比较复杂，供参考。文章一直传不上去，你自己下载吧，title：identification of Distinct Ligands for the C-type Lectin Receptors Mincle and Dectin-2 in the Pathogenic Fungus Malassezia
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8楼2013-04-23 21:14:56
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