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亚米岛

铜虫 (初入文坛)

[求助] 糖肽(肽含量很少)用β消除法分离糖链和肽段后,怎么测定该反应已经完全反应了?

本人想鉴定糖肽中是否只有O连接,用β消除法分离糖链和肽段后,怎么测定该反应已经完全反应了?求指教
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-22 11:11:36
能帮上忙就好!...

今天看到一篇文章(cell host & micorbe杂志),有检测O-连糖BEMAD完成情况的,P483右下页。看起来貌似比较复杂,供参考。文章一直传不上去,你自己下载吧,title:identification of Distinct Ligands for the C-type Lectin Receptors Mincle and Dectin-2 in the Pathogenic Fungus Malassezia
8楼2013-04-23 21:14:56
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
lz说的是β-消除-马氏加成(BEMAD)方法吧。该方法O-连接糖修饰的Thr和Ser会发生β-消除反应,在α碳和侧链原子之间形成双键,二硫苏糖醇(DTT)打开双键并与硫醇形成二硫键,进一步通过硫醇亲和柱富集糖修饰的蛋白。不知道lz是想检测什么,如果仅仅是检测O连糖有无,那反应不完全应该问题也不大。如果是想鉴定位点,那反应完全肯定是最好的。lz可以参考复旦大学一个博士论文(作者名字忘了,你可以查一下),这个人BEMAD摸了多种方法,可能会涉及到相关反应完全与否的检测。
ps,如果想测定o连糖,可以尝试pngase F酶切除N连接糖(绝大部分),再用凝集素做富集,LC-MS/MS检测,如果lz还有时间有材料去重复这个实验的话。
2楼2013-04-17 10:53:09
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亚米岛

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-17 10:53:09
lz说的是β-消除-马氏加成(BEMAD)方法吧。该方法O-连接糖修饰的Thr和Ser会发生β-消除反应,在α碳和侧链原子之间形成双键,二硫苏糖醇(DTT)打开双键并与硫醇形成二硫键,进一步通过硫醇亲和柱富集糖修饰的蛋白 ...

我想把糖链上的肽段除掉,再继续做反应,现在在确定糖肽键型,估计是只有只有O连接,请问你还记得那个论文大概是叫什么吗?我没有搜索到,麻烦你了
3楼2013-04-17 21:53:26
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 亚米岛 at 2013-04-17 21:53:26
我想把糖链上的肽段除掉,再继续做反应,现在在确定糖肽键型,估计是只有只有O连接,请问你还记得那个论文大概是叫什么吗?我没有搜索到,麻烦你了...

加到附件了。

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4楼2013-04-19 13:23:45
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