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糖肽（肽含量很少）用β消除法分离糖链和肽段后，怎么测定该反应已经完全反应了？
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| 本人想鉴定糖肽中是否只有O连接，用β消除法分离糖链和肽段后，怎么测定该反应已经完全反应了？求指教 |
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【答案】应助回帖
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lz说的是β-消除-马氏加成（BEMAD）方法吧。该方法O-连接糖修饰的Thr和Ser会发生β-消除反应，在α碳和侧链原子之间形成双键，二硫苏糖醇（DTT）打开双键并与硫醇形成二硫键，进一步通过硫醇亲和柱富集糖修饰的蛋白。不知道lz是想检测什么，如果仅仅是检测O连糖有无，那反应不完全应该问题也不大。如果是想鉴定位点，那反应完全肯定是最好的。lz可以参考复旦大学一个博士论文（作者名字忘了，你可以查一下），这个人BEMAD摸了多种方法，可能会涉及到相关反应完全与否的检测。 ps,如果想测定o连糖，可以尝试pngase F酶切除N连接糖（绝大部分），再用凝集素做富集，LC-MS/MS检测，如果lz还有时间有材料去重复这个实验的话。 |
2楼2013-04-17 10:53:09
3楼2013-04-17 21:53:26
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2013-04-19 13:23:10, 15.03 M
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