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jiangyinshen木虫 (著名写手)
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[求助]
妇科患者静脉血做基因芯片筛查
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求助各位大神，敝人现在想抽取一个妇科患者的静脉血做基因芯片筛查，请问用抗凝管抽取静脉血之后应该怎么保存，下一步应该怎么做，谢谢！ [ 来自科研家族 生物医药家族 ] |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
jiangyinshen(缩++影代发): 金币+1, 感谢应助，在整理一下就好了，O(∩_∩)O~ 2013-04-16 14:06:31
感谢参与，应助指数 +1
jiangyinshen(缩++影代发): 金币+1, 感谢应助，在整理一下就好了，O(∩_∩)O~ 2013-04-16 14:06:31
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用含枸橼酸钠抗凝剂的真空采血管采集受检者2 5 ml外周静脉血采用Axygen试剂盒Axygen Biosci-ences公司美国提取基因组DNA溶解于TE溶液分光光度计定量和纯度检测浓度为100 ng/μl纯度为OD260/OD280 =1. 8 2. 080℃保存备用 基因芯片检测检测原理以基因组DNA为模板采用带有Tag标签序列的基因位点特异性引物对相关突变位点所在基因片段进行多重等位基因特异性PCR扩增和荧光标记然后与能够识别相应标签序列的基因芯片进行杂交最后通过软件对芯片进行扫描和数据分析5。 仪器及试剂ABI 9700 PCR仪、恒温水浴箱、空气浴振荡器、晶芯LuxScan 10K-B微阵列芯片扫描仪和你要检测的基因检测试剂盒。 PCR反应将基因组DNA 3μl、PCR扩增引物混合物12. 5μl和PCR扩增试剂混合物4. 5μl混合。PCR扩增程序见表1PCR总反应时间约3 h 20 min。杂交将PCR产物加热至95℃变性5 min立即浸入冰水混合物中冰浴3 min。从两个不同的扩增体系管中各取2. 5μl PCR产物加入到10μl杂交缓冲液管中。将混合液14. 5μl加到芯片的点样区域加盖玻片封闭杂交盒然后放入50℃预热杂交箱中保温1 h。洗片在42℃洗涤液Ⅰ中以摇床洗涤2 min迅速取出放入已经预热好的42℃洗涤液Ⅱ中摇床洗涤2 min后以120 ×g离心2 min。 扫描晶芯LuxScan 10K-B微阵列芯片扫描仪以激光扫描强度90和激发波长532 nm进行芯片扫描。 结果判读 问个不该问的问题，楼主是检测什么基因？ |
2楼2013-04-16 12:14:38
流玥
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10楼2013-04-17 20:09:00
jiangyinshen
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3楼2013-04-16 12:32:37
【答案】应助回帖
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jiangyinshen(寻梦五世代发): 金币+1 2013-04-17 12:46:45
jiangyinshen(寻梦五世代发): 金币+1 2013-04-17 12:46:45
| 长期的话保存在-20摄氏度，如果全血放在4摄氏度没问题，但是只能2到3天 |
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jiangyinshen4楼2013-04-16 12:40:42
jiangyinshen
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5楼2013-04-16 13:25:23
6楼2013-04-16 13:26:45
jiangyinshen
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7楼2013-04-16 13:56:58
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8楼2013-04-16 14:14:41
9楼2013-04-17 08:17:01
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