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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 妇科患者静脉血做基因芯片筛查
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

[求助] 妇科患者静脉血做基因芯片筛查

求助各位大神，敝人现在想抽取一个妇科患者的静脉血做基因芯片筛查，请问用抗凝管抽取静脉血之后应该怎么保存，下一步应该怎么做，谢谢！

[ 来自科研家族 生物医药家族 ]
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不是風動，亦非幡動，仁者心動
1楼2013-04-16 11:44:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

侯伯杨

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jiangyinshen(缩++影代发): 金币+1, 感谢应助，在整理一下就好了，O(∩_∩)O~ 2013-04-16 14:06:31
用含枸橼酸钠抗凝剂的真空采血管采集受检者2 5 ml外周静脉血采用Axygen试剂盒Axygen Biosci-ences公司美国提取基因组DNA溶解于TE溶液分光光度计定量和纯度检测浓度为100 ng/μl纯度为OD260/OD280 =1. 8 2. 080℃保存备用
基因芯片检测检测原理以基因组DNA为模板采用带有Tag标签序列的基因位点特异性引物对相关突变位点所在基因片段进行多重等位基因特异性PCR扩增和荧光标记然后与能够识别相应标签序列的基因芯片进行杂交最后通过软件对芯片进行扫描和数据分析5。
仪器及试剂ABI 9700 PCR仪、恒温水浴箱、空气浴振荡器、晶芯LuxScan 10K-B微阵列芯片扫描仪和你要检测的基因检测试剂盒。
PCR反应将基因组DNA 3μl、PCR扩增引物混合物12. 5μl和PCR扩增试剂混合物4. 5μl混合。PCR扩增程序见表1PCR总反应时间约3 h 20 min。杂交将PCR产物加热至95℃变性5 min立即浸入冰水混合物中冰浴3 min。从两个不同的扩增体系管中各取2. 5μl PCR产物加入到10μl杂交缓冲液管中。将混合液14. 5μl加到芯片的点样区域加盖玻片封闭杂交盒然后放入50℃预热杂交箱中保温1 h。洗片在42℃洗涤液Ⅰ中以摇床洗涤2 min迅速取出放入已经预热好的42℃洗涤液Ⅱ中摇床洗涤2 min后以120 ×g离心2 min。
扫描晶芯LuxScan 10K-B微阵列芯片扫描仪以激光扫描强度90和激发波长532 nm进行芯片扫描。
结果判读


问个不该问的问题，楼主是检测什么基因？
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没个性....
2楼2013-04-16 12:14:38
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流玥

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
全血长期保存的话还是要加些血液的冻存液，不然血细胞破裂就完了…………
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10楼2013-04-17 20:09:00
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普通回帖

jiangyinshen

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 侯伯杨 at 2013-04-16 12:14:38
用含枸橼酸钠抗凝剂的真空采血管采集受检者2 5 ml外周静脉血采用Axygen试剂盒Axygen Biosci-ences公司美国提取基因组DNA溶解于TE溶液分光光度计定量和纯度检测浓度为100 ng/μl纯度为OD260/OD280 ...

先感谢一下高手！
老板刚刚布置给我的紧急任务，还没告诉我要检测神马，所以这个我也很想知道，回头我问问老板，估计是不孕症相关的吧···
再跟您请教一下，我搞清楚检测什么基因之后，现在订引物和PCR试剂盒，最快也要一周能到货吧，那么我用抗凝管取的患者静脉血应该怎么保存，是常温还是4度还是-20？能保存多久？谢谢
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不是風動，亦非幡動，仁者心動
3楼2013-04-16 12:32:37
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侯伯杨

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
jiangyinshen(寻梦五世代发): 金币+1 2013-04-17 12:46:45
长期的话保存在-20摄氏度，如果全血放在4摄氏度没问题，但是只能2到3天
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jiangyinshen
没个性....
4楼2013-04-16 12:40:42
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 侯伯杨 at 2013-04-16 12:40:42
长期的话保存在-20摄氏度，如果全血放在4摄氏度没问题，但是只能2到3天

多谢高手
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不是風動，亦非幡動，仁者心動
5楼2013-04-16 13:25:23
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侯伯杨

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by jiangyinshen at 2013-04-16 13:25:23
多谢高手...

没事，注意你早日成功哈，以后多多在医学版块活动活动哈
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没个性....
6楼2013-04-16 13:26:45
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 侯伯杨 at 2013-04-16 13:26:45
没事，注意你早日成功哈，以后多多在医学版块活动活动哈...

好的，一定
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不是風動，亦非幡動，仁者心動
7楼2013-04-16 13:56:58
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侯伯杨

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jiangyinshen at 2013-04-16 13:56:58
好的，一定...

8楼2013-04-16 14:14:41
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qukaikai

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
寻梦五世: 金币+2, 感谢应助 2013-04-17 12:47:11
你是做基因表达谱芯片，还是DNA芯片
前者是要提取总RNA的，跟提DNA步骤不同
如果你们想筛选表达差异基因，一般是做基因表达谱芯片
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9楼2013-04-17 08:17:01
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