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pdiudiu0214铁虫 (小有名气)
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[求助]
关于双向样品预处理还原和烷基化的问题！请大侠指点！谢谢！
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| 各位大侠在做双向的时候样品预处理有还原和烷基化吗？如果用DTT和IAA的话用量是多少？如果跑17cm的胶第二项恒流的电流分别是多大？时间分别是多久？盐桥怎么搭？我们的水化和聚焦是连在一起的，是加完样把滤纸放铂丝上吗？谢谢各位大侠！ |
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guxinhan123
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【答案】应助回帖
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pdiudiu0214: 金币+3 2013-04-16 15:47:48
pdiudiu0214: 金币+3 2013-04-16 15:47:48
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低电流的时候是只要看到溴酚蓝的线已经移动到胶条下方就可以升压了，还是需要再等一段时间再升压？这没有似乎硬性要求，稍等会可能效果好些。 至于第二向的SDS-PAGE正式电泳时的具体电压于凝胶类型有关，10%T的凝胶20mA-40mA均可；12.5%T的凝胶20mA，40mA，50mA均可；9-18%T的凝胶20mA-50mA均可，较高电流用于蛋白质样品完全走出IPG胶条（溴酚蓝的线完全走出IPG胶条）,并且移走IPG后的电泳。溴酚蓝的线进入阳极缓冲溶液约10分钟即可终止电泳。 |
5楼2013-04-16 11:08:52