24小时热门版块排行榜    

查看: 817  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

345430706

金虫 (初入文坛)

[求助] 纯化后的DNA在琼脂糖胶上跑不出来,克隆长不出菌落是什么原因

我要做细菌的克隆测序,但在克隆一步长不出菌落,发现二次PCR胶回收纯化后的产物在琼脂糖胶上跑不出条带,这是什么原因呢?之前相同的感受态细胞有做出来过的。烦劳各位指点迷津啊!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


stormxuhao: 金币+1, 积极回复 2013-04-23 09:22:37
是这样,如果你的PCR条带比较单一,那你采用直接过柱纯化就可以.不用切胶.
如果你的条带不单一,那就只能切胶了.切胶的时候,切下来的胶条不要太大,尽量下.另外,你的反应体系可以加大到50uL,这样回收后即使损失50%,剩余的量也足够你进行连接了.
4楼2013-04-23 09:00:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


nickxiaotong: 金币+1, 感谢提供建议 欢迎常来环境版参与交流 2013-04-23 08:29:15
那是不是你PCR产物纯化的时候丢失了?

那你再重新做一下试试吧。
2楼2013-04-22 16:28:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

345430706

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-04-22 16:28:34
那是不是你PCR产物纯化的时候丢失了?

那你再重新做一下试试吧。

我已经重做好多次了,实验室师姐们都成功过,一直也忽略掉是纯化的问题,后来做连接的对照都长出来了的,才回去找纯化的原因。我二次PCR后的长度在100-200bp之间,亮度也还可以,纯化试剂盒用的生工的SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒。能不能介绍下您的经验啊
3楼2013-04-22 20:22:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 【同济软件】软件(085405)考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸! 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-13 6/300 2026-03-18 14:14 by 脱颖而出
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 10/500 2026-03-17 15:07 by 一鸭鸭哟
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
请填处理意见