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毛状根PCR检测无条带
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各位虫友，最近用微量DNA提取毛状根基因组，浓度检测为0.177微克/微升，260/280=1.44 之后进行PCR检测： 阳性对照 Ri质粒（来源于A4） 阴性对照 植物基因组DNA 模板 毛状根DNA 空白对照 PCR条件： rolC 基因(624bp)的引物:5’-CTCCTGACATCAAACTCGTC-3’， 5’-TGCTTCGAGTTATGGGTACA-3’， （1）条件：94℃，5min；94℃，40s：55℃，40s：72℃，1min，35个循环；72℃，8min （2）94℃，3min；94℃，1min：53.5℃，1min：72℃，1min，35个循环；72℃，10min rolB 基因(423bp)的引物: 5’-GCTCTTGCAGTGCTAGATTT-3’， 5’-GAAGGTGCAAGCTACCTCTC-3’， 条件：94℃，3min；94℃，50s：56℃，45s：72℃，1min，34个循环；72℃，10min PCR结果跑1%电泳，除了marker2000其他的都木有。。。。。。。 很奇怪连阳性对照都木有，我的引物是按参考文献走的，是不是不是所有的Ri质粒都相同？所以这个引物不适合A4呢？ 我的PCR条件是否退火温度太高呢？我之后应该怎么办呢？求助各位啊。。。。 |
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