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zhxzzzzzz

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提取的12kb的pHB质粒总比线性的跑得慢,为什么?

最近一直用全式金的小提试剂盒提取一个表达载体,12kb,提出的质粒只有一条带。1%胶电泳时,提出的质粒pHB总是比单酶切的pHB跑得慢,是因为提出来的不是超螺旋吗?是我提的手法有问题,还是其它的原因?我都不知道这样的质粒能不能用来做下一步的酶切连接转化了。
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寻寻觅觅,谁在灯火阑珊处?
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wxf8470

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhxzzzzzz at 2013-04-13 06:54:48
谢谢了!那就可以按测OD得到的浓度来计算双酶切需要的载体量了?我以为是按超螺旋的量来算的。...

当然可以,放心往下做吧!
4楼2013-04-13 20:27:40
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wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-14 08:36:05
不影响使用!包括酶切,转染,转化,表达分析啊什么的。
不是超螺旋,两条链中有一条断了。
大质粒经常遇到,再温柔一些可能就得到超螺旋的了。
2楼2013-04-13 19:21:40
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zhxzzzzzz

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wxf8470 at 2013-04-13 19:21:40
不影响使用!包括酶切,转染,转化,表达分析啊什么的。
不是超螺旋,两条链中有一条断了。
大质粒经常遇到,再温柔一些可能就得到超螺旋的了。

谢谢了!那就可以按测OD得到的浓度来计算双酶切需要的载体量了?我以为是按超螺旋的量来算的。
寻寻觅觅,谁在灯火阑珊处?
3楼2013-04-13 19:54:48
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半边脸

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

2楼说的对,可能是其中一条链断裂的原因,不影响使用,反正你经过酶切验证就可以了
5楼2013-04-29 17:02:14
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