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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提取的12kb的pHB质粒总比线性的跑得慢，为什么？
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zhxzzzzzz

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提取的12kb的pHB质粒总比线性的跑得慢，为什么？

最近一直用全式金的小提试剂盒提取一个表达载体，12kb，提出的质粒只有一条带。1%胶电泳时，提出的质粒pHB总是比单酶切的pHB跑得慢，是因为提出来的不是超螺旋吗？是我提的手法有问题，还是其它的原因？我都不知道这样的质粒能不能用来做下一步的酶切连接转化了。
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1楼 2013-04-13 15:00:01
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zhxzzzzzz

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wxf8470 at 2013-04-13 19:21:40
不影响使用！包括酶切，转染，转化，表达分析啊什么的。
不是超螺旋，两条链中有一条断了。
大质粒经常遇到，再温柔一些可能就得到超螺旋的了。

谢谢了！那就可以按测OD得到的浓度来计算双酶切需要的载体量了？我以为是按超螺旋的量来算的。
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寻寻觅觅，谁在灯火阑珊处？
3楼2013-04-13 19:54:48
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wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-14 08:36:05
不影响使用！包括酶切，转染，转化，表达分析啊什么的。
不是超螺旋，两条链中有一条断了。
大质粒经常遇到，再温柔一些可能就得到超螺旋的了。
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2楼2013-04-13 19:21:40
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wxf8470

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhxzzzzzz at 2013-04-13 06:54:48
谢谢了！那就可以按测OD得到的浓度来计算双酶切需要的载体量了？我以为是按超螺旋的量来算的。...

当然可以，放心往下做吧！
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4楼2013-04-13 20:27:40
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半边脸

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

2楼说的对，可能是其中一条链断裂的原因，不影响使用，反正你经过酶切验证就可以了
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5楼2013-04-29 17:02:14
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