| 查看: 4443 | 回复: 5 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
急求！！ACC脱氨酶活性测定问题？？
|
|||
|
是这样的~~~之前有师兄师姐分离出来的菌株测定出来是有ACC脱氨酶活性的，能很明显的看到颜色对比，但是后来老师让我重新测定的时候，同样的方法再怎么测都测不出来，我想求教一下哪位做过这个实验的大侠，这个实验中有什么要特别注意的地方吗？我已经做了不下5次了,都快崩溃了。我下面贴出我的实验过程。。。请大家指教一下。 酶活测定： Sample Text 供试菌株在5mLTSB 培养液中扩大培养2d后，8000 g ，4 ℃离心10min， Sample Text 重新悬浮于5mLDF 培养液，加入30uL0.5M的ACC母液，使得ACC终浓度为3.0mM（ACC在水溶液中不稳定，因此过滤除菌后，保存在-20°C环境下)，室温(21士1℃)振荡培养2 d 后，8000 g ，4 ℃离心10min收集菌体； Sample Text. 用0.1 mol L-1 Tris-HCI 缓冲液（pH=7.6）洗涤三次，重悬浮于600 μL 0.1 mol L-1 Tris-HCI 缓冲液（pH=8.0）中，加入 30 μL 甲苯并迅速振荡30 s 以破碎细胞，转移200 μL含甲苯的细胞提取物，加入20 μL 0.5 M ACC 充分混匀；同时做不添加ACC 的空白试验，30 ℃水育 15 min后，立即放置于冰浴环境中终止反应；另取200uL在半小时内完成蛋白测定（或放置于4°C环境下待测）； Sample Text 添加1 mL 0.56 mol L-1 HCl，简单涡旋后，16 000 g，室温下离心5 min，取 1 mL 悬浮液，加入800 μL 0.56 mol L-1 HCl 和300 μL 0.2%2，4-二硝基苯肼，充分混匀后30 ℃水育 30 min，加入 2 mL 2 mol L-1 NaOH，540 nm 测吸光度。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验方案 |
» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 六磷酸葡萄糖脱氢酶活性测定
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教：3-磷酸甘油醛脱氢酶活性测定方法
已经有8人回复
|
本帖内容被屏蔽 |
6楼2018-08-14 15:38:48
2楼2017-06-30 22:24:13
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2018-05-03 21:27:40
4楼2018-07-23 10:16:24
