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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 急求！！ACC脱氨酶活性测定问题？？
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芦苇青青

新虫 (初入文坛)

[求助] 急求！！ACC脱氨酶活性测定问题？？

是这样的~~~之前有师兄师姐分离出来的菌株测定出来是有ACC脱氨酶活性的，能很明显的看到颜色对比，但是后来老师让我重新测定的时候，同样的方法再怎么测都测不出来，我想求教一下哪位做过这个实验的大侠，这个实验中有什么要特别注意的地方吗？我已经做了不下5次了,都快崩溃了。我下面贴出我的实验过程。。。请大家指教一下。
酶活测定：
Sample Text 供试菌株在5mLTSB 培养液中扩大培养2d后，8000 g ，4 ℃离心10min，  
Sample Text 重新悬浮于5mLDF 培养液，加入30uL0.5M的ACC母液，使得ACC终浓度为3.0mM（ACC在水溶液中不稳定，因此过滤除菌后，保存在-20°C环境下)，室温(21士1℃)振荡培养2 d 后，8000 g ，4 ℃离心10min收集菌体；
Sample Text.  用0.1 mol L-1 Tris-HCI 缓冲液（pH=7.6）洗涤三次，重悬浮于600 μL 0.1 mol L-1 Tris-HCI 缓冲液（pH=8.0）中，加入 30 μL 甲苯并迅速振荡30 s 以破碎细胞，转移200 μL含甲苯的细胞提取物，加入20 μL 0.5 M ACC 充分混匀；同时做不添加ACC 的空白试验，30 ℃水育 15 min后，立即放置于冰浴环境中终止反应；另取200uL在半小时内完成蛋白测定（或放置于4°C环境下待测）；
Sample Text 添加1 mL 0.56 mol L-1 HCl，简单涡旋后，16 000 g，室温下离心5 min，取 1 mL 悬浮液，加入800 μL 0.56 mol L-1 HCl 和300 μL 0.2%2，4-二硝基苯肼，充分混匀后30 ℃水育 30 min，加入 2 mL 2 mol L-1 NaOH，540 nm 测吸光度。
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1楼 2013-04-11 14:50:03
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东篱泽畔

新虫 (初入文坛)
你的问题解决了嘛？能指教一下我嘛？

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-06-30 22:24:13
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我是小贝啊

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2018-05-03 21:27:40
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wangmiaoying

新虫 (初入文坛)
我也遇到相同问题 最后怎么解决的呢？
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4楼2018-07-23 10:16:24
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wangmiaoying

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 东篱泽畔 at 2017-06-30 22:24:13
你的问题解决了嘛？能指教一下我嘛？

您好 我最近也在测ACC脱氨酶活性 但是实验失败 不知您测出来了咩
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5楼2018-07-23 10:20:36
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李太白123

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2018-08-14 15:38:48
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