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缤纷惠儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 做Western如何一张膜同时做3个单抗，我知道剪膜，但总是剪不好，如何精确剪膜？？？

做Western想同时做几个单抗，我们的方法是剪开FVDF膜，分别孵育不同的一抗，但是，即使有marker作为参考，还是剪不好，有时做不出来就经常怀疑是剪膜把蛋白减到别的部分上去了，求助各位大侠，你们是如何做的？？？
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吃亏是福，好人有好报
1楼 2013-04-10 22:17:57
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缤纷惠儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssy7166 at 2013-04-10 23:10:08
方法1：如果你的蛋白很多，多跑几板胶，整张膜只上一个抗体，而且坚持用同一产品Marker同一浓度的分离胶,多做几次就能确定目的蛋白相对与marker的位置。

方法2：如果蛋白样不多时，整张膜先上一个最重要的抗体； ...

PVDF膜可以回收利用三次吗？如果整张膜只做一个抗体，想5×6cm2这么大的膜得用多少毫升的二抗稀释液啊？怎么感觉这样有些浪费呢
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吃亏是福，好人有好报
6楼2013-04-11 11:26:42
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ssy7166

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 2013-04-11 08:13:09
方法1：如果你的蛋白很多，多跑几板胶，整张膜只上一个抗体，而且坚持用同一产品Marker同一浓度的分离胶,多做几次就能确定目的蛋白相对与marker的位置。

方法2：如果蛋白样不多时，整张膜先上一个最重要的抗体；发光后用strip buffer洗，然后再上第二种抗体，再洗；最后还可以再上一下内参。

多做WB慢慢就会有感觉了。
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2楼2013-04-10 23:10:08
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hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用丽春红染一下膜，看着条带见就是了。完了之后在用tbst把丽春红洗掉就可以了
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scienceguy
3楼2013-04-10 23:57:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用预染的marker分开要剪开的样品泳道，剪marker中间就可以了。
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4楼2013-04-11 02:17:20
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