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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么荧光定量PCR扩增曲线呈倒S型
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ybQuan at 2013-04-12 10:53:23
可能有原因有:
模板浓度不一样，而且样品浓度量偏大导致抑制反应，S曲线没有起来——将两个样品DNA浓度测一下，稀释到相同浓度。
体系配比不对，各成分没有充分混匀；加样后没有离心——保证加样成分准确，并在加 ...

模板都是同一管稀释好的加的 震荡离心 我这个都注意了 应该不是这里的问题 最大的问题就是 这是两个一模一样的体系啊……
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11楼2013-04-12 12:36:45
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by love_st at 2013-04-11 16:49:06
不敢确定是什么原因，但是，你可以重复10管看看，或者做个梯度下去

我重复过3管 但是就会有2管有问题
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12楼2013-04-12 12:40:29
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by yucuiyuan00 at 2013-04-12 12:40:29
我重复过3管 但是就会有2管有问题...

搞不明白，从试剂或者仪器上面找找找原因，有没有做过比这高浓度模板的重复呢
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13楼2013-04-12 12:49:05
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by love_st at 2013-04-12 12:49:05
搞不明白，从试剂或者仪器上面找找找原因，有没有做过比这高浓度模板的重复呢...

仪器是伯乐的CFX-96 只有这一台仪器 高模板浓度的也会出现这种问题
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14楼2013-04-12 13:39:29
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ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yucuiyuan00 at 2013-04-12 12:36:45
模板都是同一管稀释好的加的 震荡离心 我这个都注意了 应该不是这里的问题 最大的问题就是 这是两个一模一样的体系啊……...

有没有测过模板浓度有多大?你用的是什么公司试剂，看图有点像是ABI的机器。
再仔细想想吧，总是有原因的吧
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哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
15楼2013-04-12 16:31:15
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yiloutingyu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yucuiyuan00 at 2013-04-12 08:32:36
我的扩增曲线荧光值一直很低 我觉得可能是仪器的原因 因为我PCR好了之后 用酶标仪测过荧光值 很高的...

那你再看看你的仪器吧，有大师也给我说过有可能是仪器的原因 信号不稳定等
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16楼2013-04-12 22:38:57
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fywjp

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yucuiyuan00: 金币+3, 我之后试试 2013-04-13 22:53:56
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 12:16:34
这个倒s问题是由于模板浓度过大导致，可以稀释100再试一试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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17楼2013-04-12 22:59:28
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ybQuan at 2013-04-12 16:31:15
有没有测过模板浓度有多大?你用的是什么公司试剂，看图有点像是ABI的机器。
再仔细想想吧，总是有原因的吧...

我用伯乐的CEX-96 应该是模板的问题 我再试试吧
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18楼2013-04-13 22:55:21
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wangkj
19楼2013-04-13 23:59:38
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5utr

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励新虫发贴交流！ 2013-05-10 12:17:03
楼上都是乱说，这个曲线典型的原因就是两条引物退火温度差别太大，换个软件测试下退火温度，相差不到两度后就好了。
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20楼2013-05-10 12:10:14
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