应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么荧光定量PCR扩增曲线呈倒S型
282/3返回列表上一页123下一页
查看: 7767  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ybQuan at 2013-04-12 10:53:23
可能有原因有:
模板浓度不一样，而且样品浓度量偏大导致抑制反应，S曲线没有起来——将两个样品DNA浓度测一下，稀释到相同浓度。
体系配比不对，各成分没有充分混匀；加样后没有离心——保证加样成分准确，并在加 ...

模板都是同一管稀释好的加的 震荡离心 我这个都注意了 应该不是这里的问题 最大的问题就是 这是两个一模一样的体系啊……
赞一下 回复此楼
保持平常心❤
11楼2013-04-12 12:36:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by love_st at 2013-04-11 16:49:06
不敢确定是什么原因，但是，你可以重复10管看看，或者做个梯度下去

我重复过3管 但是就会有2管有问题
赞一下 回复此楼
保持平常心❤
12楼2013-04-12 12:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by yucuiyuan00 at 2013-04-12 12:40:29
我重复过3管 但是就会有2管有问题...

搞不明白，从试剂或者仪器上面找找找原因，有没有做过比这高浓度模板的重复呢
赞一下 回复此楼
13楼2013-04-12 12:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by love_st at 2013-04-12 12:49:05
搞不明白，从试剂或者仪器上面找找找原因，有没有做过比这高浓度模板的重复呢...

仪器是伯乐的CFX-96 只有这一台仪器 高模板浓度的也会出现这种问题
赞一下 回复此楼
保持平常心❤
14楼2013-04-12 13:39:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yucuiyuan00 at 2013-04-12 12:36:45
模板都是同一管稀释好的加的 震荡离心 我这个都注意了 应该不是这里的问题 最大的问题就是 这是两个一模一样的体系啊……...

有没有测过模板浓度有多大?你用的是什么公司试剂，看图有点像是ABI的机器。
再仔细想想吧，总是有原因的吧
赞一下 回复此楼
哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
15楼2013-04-12 16:31:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yiloutingyu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yucuiyuan00 at 2013-04-12 08:32:36
我的扩增曲线荧光值一直很低 我觉得可能是仪器的原因 因为我PCR好了之后 用酶标仪测过荧光值 很高的...

那你再看看你的仪器吧，有大师也给我说过有可能是仪器的原因 信号不稳定等
赞一下 回复此楼
16楼2013-04-12 22:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fywjp

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yucuiyuan00: 金币+3, 我之后试试 2013-04-13 22:53:56
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 12:16:34
这个倒s问题是由于模板浓度过大导致，可以稀释100再试一试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
17楼2013-04-12 22:59:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ybQuan at 2013-04-12 16:31:15
有没有测过模板浓度有多大?你用的是什么公司试剂，看图有点像是ABI的机器。
再仔细想想吧，总是有原因的吧...

我用伯乐的CEX-96 应该是模板的问题 我再试试吧
赞一下 回复此楼
保持平常心❤
18楼2013-04-13 22:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangkj
19楼2013-04-13 23:59:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

5utr

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励新虫发贴交流！ 2013-05-10 12:17:03
楼上都是乱说，这个曲线典型的原因就是两条引物退火温度差别太大，换个软件测试下退火温度，相差不到两度后就好了。
赞一下 回复此楼
20楼2013-05-10 12:10:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yucuiyuan00 的主题更新
282/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:05 by FChKX8meu1ds
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭