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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么荧光定量PCR扩增曲线呈倒S型
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 5utr at 2013-05-10 12:10:14
楼上都是乱说，这个曲线典型的原因就是两条引物退火温度差别太大，换个软件测试下退火温度，相差不到两度后就好了。

生工合成的引物 他们的软件计算的Tm值 跟我用oligo预测的还是有差别的 PS：你不是应助回帖 我没有办法给你金币……
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保持平常心❤
21楼2013-05-11 10:53:26
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qingzhu333

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yucuiyuan00: 金币+5, ★有帮助, 我知道这个仪器有边缘效应 我一直尽量放中间的 嘿嘿 2013-07-17 08:16:21
你把几个离心管都放中间的几个测试孔试试
你回忆一下以前的实验，是不是有的放在中间，有的在边上，那样的话温度差别会比较大，曲线很难完全一致。
伯乐的仪器属于低端产品（在网上看到的，不知道是否真实），所以感觉要注意一下这个问题
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22楼2013-07-16 14:22:49
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宋虫虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

扩增仪该做校验了，本底信号太强。
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让自己变得更强
23楼2013-07-18 21:46:52
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宋虫虫

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 宋虫虫 at 2013-07-18 21:46:52
扩增仪该做校验了，本底信号太强。

或者把基线的范围调整的宽一些，信号值就能压下来。
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让自己变得更强
24楼2013-07-18 21:48:20
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，请问你质粒稀释多少倍，我稀释到10-5
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啊
25楼2015-07-30 16:19:57
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东东i号

新虫 (初入文坛)
请问楼主，当时的问题是怎么解决了，我最近跑了一个温度梯度，也出现了类似曲线，请问楼主是否能帮忙解答下，非常谢谢
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26楼2015-12-20 14:12:16
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许彦

木虫 (正式写手)
基线设置的问题。选择13-18应该就没问题了，

发自小木虫Android客户端
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27楼2015-12-20 16:02:34
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liping121200

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们有的时候机器在一天中跑第一版，机器没有提前预热的情况下会出现这种问题，不知道你那个会不会有这种情况
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好好学习，天天向上
28楼2015-12-21 11:21:24
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