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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因克隆转化表达遇到问题，求大神解答
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echochen1017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 守好我的道 at 2013-04-10 02:03:11
做个实验对照。个人认为可以这样设计：首先用你所用的pET28B，直接转化，涂板。长斑正常，说明你用的平板，感受态细胞和转化的操作没有问题。其次再验证你的酶切和连接有没有问题。一个一个的验证，实验做不出来，总 ...

在做转化的时候，平板如果放的时间比较长（2周内），菌液涂上去快速就干掉， 这样是不是就不会长菌了？
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11楼2013-04-27 21:28:01
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守好我的道

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2013-04-28 09:58:21
平板是容易染菌的，建议保存时间不要过十天。但是，我们也有用过保存一个月的平板（用保鲜膜包好，4度保存），取决于你倒置平板时的无菌操作。
菌液涂上去，干的速度是比较的快，100ul的菌液，三十分钟应该就会干了。至于会不会长菌？很大的程度取决于你连接的好坏。祝顺利。
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12楼2013-04-27 21:39:57
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
涂个空白版试试，如果不行说明感受态有问题；
降低平板中抗生素浓度
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第三军团
13楼2013-05-05 16:02:27
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echochen1017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xutao at 2013-05-05 16:02:27
涂个空白版试试，如果不行说明感受态有问题；
降低平板中抗生素浓度

现在空白对照验明是感受态问题，我们没有4度离心机，想求问怎么做感受态呢？注意事项有什么呢？
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14楼2013-05-08 08:28:14
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echochen1017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 守好我的道 at 2013-04-27 21:39:57
平板是容易染菌的，建议保存时间不要过十天。但是，我们也有用过保存一个月的平板（用保鲜膜包好，4度保存），取决于你倒置平板时的无菌操作。
菌液涂上去，干的速度是比较的快，100ul的菌液，三十分钟应该就会干了 ...

放的太久的话，涂上去立马就干。。。。现在发现应该是感受态的问题。。。但是同批做的DH5α的感受态就没问题，因为同期构建了另外一个质粒，成功了
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15楼2013-05-08 08:29:37
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