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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于葡萄糖氧化酶分离纯化的柱子选择
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子非水

银虫 (小有名气)

[求助] 关于葡萄糖氧化酶分离纯化的柱子选择

各位大侠好：
      本人最近在做葡萄糖的氧化酶的分离纯化，想使用AKTA纯化仪，但是柱子不知道怎么选，分子量约60-80K，等电点4.2，想先做离子交换，然后凝胶过滤层析，分子筛等，请各位大侠指点一下怎么选择柱子，如果有参考资料就更好了，或者有什么经验分享，小弟感激不尽。
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1楼 2013-04-08 20:30:50
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huaqiangliu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
纯度要求高吗 不高直接就盐析 超滤 浓缩  如果纯度要求高的话  那就再加上离子交换  凝胶过滤 冻干就OK了。
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2楼2013-04-09 10:58:54
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子非水

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huaqiangliu at 2013-04-09 10:58:54
纯度要求高吗 不高直接就盐析 超滤 浓缩  如果纯度要求高的话  那就再加上离子交换  凝胶过滤 冻干就OK了。

纯度要求高，你前面说的盐析，超滤，浓缩都做过了，想用蛋白纯化仪上柱子做一做
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3楼2013-04-09 20:53:16
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huaqiangliu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
子非水: 金币+3, ★有帮助 2013-04-10 16:42:29
引用回帖:
3楼: Originally posted by 子非水 at 2013-04-09 20:53:16
纯度要求高，你前面说的盐析，超滤，浓缩都做过了，想用蛋白纯化仪上柱子做一做...

那就上AKTA做呗。买GE的填料自己装柱子或则买他的预装柱。不过挺贵的。呵呵特别是你摸索条件，估计一两种柱子解决不了。其实国产的填料现在做的已经很好了，你完全可以选择国内的填料和柱子。我们做过实验替代一点问题没有，价格便宜一半。呵呵  你都知道是什么东西了，因该有方法借鉴。
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4楼2013-04-10 08:55:09
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子非水

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huaqiangliu at 2013-04-10 08:55:09
那就上AKTA做呗。买GE的填料自己装柱子或则买他的预装柱。不过挺贵的。呵呵特别是你摸索条件，估计一两种柱子解决不了。其实国产的填料现在做的已经很好了，你完全可以选择国内的填料和柱子。我们做过实验替代一点 ...

好吧，我找了些资料自己先看看，谢谢你
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5楼2013-04-10 16:41:43
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tiu007

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
子非水: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢你，我试试再说 2013-04-13 19:00:45
如果盐析、超滤都做过了，建议你直接买GE的同时具离子交换和分子筛效应的树脂，根据你选择的pH,考虑用阳离子还是阴离子交换树脂就行了，像CM-sephadex....系列的，这样可以保证收率，像你设计的两步树脂，你最后估计捞不到多少东西。
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6楼2013-04-11 11:15:38
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
子非水: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢你，我先做做试试 2013-04-13 19:01:07
蛋白质性质不同，纯化条件可能会有些差别，在现有条件下做一次之后上图说话。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2013-04-12 01:26:43
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