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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 质粒双酶切BSA怎么加？

各位同学，我做的是双酶切，用NcoⅠ和XhoⅠ俩个酶，用的BUFFER写的是1×K+BSA，请问一下这个酶切体体系是什么啊？BSA加多少量啊？比如我总体系想切5μL！请同学们帮忙知道下！以前没加BSA的酶切体系如下：质粒3uL，水：1uL，buffer：0.5uL，酶各0.25uL！

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1楼 2013-04-07 12:58:45

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Leo_xin

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

K+BSA  估计你用的TAKARA公司的酶。

buffer一般是10乘的，BSA一般是100乘的，所以你最后体系里肯定把这两个稀释成1乘。

双酶切的话要看这两种酶的最适温度，buffer是不是一样，如果一样就直接把两种酶一起加。总酶量最好小于体系的10%

如果buffer不一样，那就得加完一种酶后一段时间  过柱回收再加第二种酶（换buffer）

如果温度不一样，buffer一样，那就先加一个酶一段时间后，  可以选择灭活下  加下一个酶（不用换buffer）