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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒双酶切BSA怎么加?

各位同学,我做的是双酶切,用NcoⅠ和XhoⅠ俩个酶,用的BUFFER写的是1×K+BSA,请问一下这个酶切体体系是什么啊?BSA加多少量啊?比如我总体系想切5μL!请同学们帮忙知道下!以前没加BSA的酶切体系如下:质粒3uL,水:1uL,buffer:0.5uL,酶各0.25uL!
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Leo_xin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
K+BSA  估计你用的TAKARA公司的酶。

buffer一般是10乘的,BSA一般是100乘的,所以你最后体系里肯定把这两个稀释成1乘。

双酶切的话要看这两种酶的最适温度,buffer是不是一样,如果一样就直接把两种酶一起加。总酶量最好小于体系的10%

如果buffer不一样,那就得加完一种酶后一段时间  过柱回收再加第二种酶(换buffer)

如果温度不一样,buffer一样,那就先加一个酶 一段时间后,  可以选择灭活下  加下一个酶(不用换buffer)
还有太多地方值得改进。
12楼2013-04-08 12:47:49
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shangrila911

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励应助,分子生物版块,期待你的精彩。 2013-04-07 13:47:03
小虫子MM: 金币+1, 有帮助 2013-04-11 17:36:25
K+BSA  是一种反应缓冲液 是成品  不是自己可以分开加的
一切都会好的!
2楼2013-04-07 13:40:30
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shangrila911 at 2013-04-07 13:40:30
K+BSA  是一种反应缓冲液 是成品  不是自己可以分开加的

我们买的酶,比如XhoⅠ,袋里就带有0.1%的BSA啊
3楼2013-04-07 14:52:25
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auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小虫子MM: 金币+2, 有帮助 2013-04-11 17:34:41
如果你是做克隆的话,建议你根本就不要加BSA,因为BSA虽然可降低star activity,但是也影响activity. 一般1-2ug的plasmid, 1ul (10u/ul)enzyme, 1hr-1.5hr足够了
4楼2013-04-07 15:00:03
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