| 查看: 1383 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
一步RT-PRC后样品卡在凝胶孔了
|
||
|
提细胞总RNA，跑出三条带了，第一条比第二条亮一倍多。 然后RT-PCR用特异性引物做，阳性对照，阴性对照，实验组都没有东西，marker出来了。那三组凝胶孔发亮。 我加的模板是3微，由于没机会测浓度和OD260/280，第一次做的时候加了5微，也是一样的效果。 由于引物除了互补区外还加了酶切位点和保护碱基，就逆转录过后5个循环是不算酶切位点的退火温度，剩下做了25个循环是按照全长引物算的，大概提高了7度。 由于内参也没有做出来，我很是抑郁。 想知道，是不是就是因为我没有测纯度和浓度造成的。但是我跑总RNA的时候条带除了28s的两侧有一点拖尾，另外两条都很好，亮度也不错。 PS，如果我引物不是完全互补的，是不是会造成PCR的难度捏。那我是不是应该用两步RTPCR比较好？ 拜托大神们了！  rtpcr.jpg  总RNA.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有272人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
8楼2013-04-07 21:46:33
emosgaogao
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1314
- 红花: 2
- 帖子: 285
- 在线: 140小时
- 虫号: 1079829
- 注册: 2010-08-22
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
2楼2013-04-07 00:04:14
mitocam
新虫 (正式写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 金币: 1114.5
- 散金: 93
- 红花: 2
- 帖子: 728
- 在线: 152.1小时
- 虫号: 1899939
- 注册: 2012-07-19
- 专业: 细胞呼吸与代谢
3楼2013-04-07 01:08:04
4楼2013-04-07 10:13:19
40