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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原位杂交 与 gus 染色 需不需要都做
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nfuyuer

木虫 (正式写手)

[求助] 原位杂交 与 gus 染色 需不需要都做

我的 实验材料是南瓜，想看一个位于根韧皮薄壁组织细胞膜上一个转运蛋白基因的表达情况。
    目前该基因的全长及启动子什么的在南瓜中没有报道，但该基因在拟南芥、水稻、大麦等模式植物中已经研究充分。现在的想法是希望明确该编码转运蛋白基因在组织水平（根的不同部位——皮层，内皮层等）及亚细胞水平（细胞膜、液泡膜）上的表达情况。看了一些别人的文献，好像gus和原位杂交都能对基因表达进行定位，那么请问针对我的实验目的，如何选择合适的方法？是否gus在这种条件下无法使用？希望实验最终能获得比较漂亮的照片，我看gus的图片都很好，荧光原位杂交是不是出的图像要差一点呢？
   刚开始涉及分子实验，希望大家不吝赐教。
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make·believe
1楼 2013-04-06 16:38:52
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wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-07 08:57:22
包埋后切片，如果能做的话GUS就能解决问题。
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2楼2013-04-06 20:41:55
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running113

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-07 08:56:57
看你的意思应该对已知基因的研究。
个人感觉原位杂交比较适合于已知基因。
gus定位没有使用过，感觉比较适合于做外源基因导入的报告实验。
呵呵！
有没有其他高手也来给解答一下。
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SCI我来了！！！
3楼2013-04-06 20:57:25
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夏尔list

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-07 08:57:09
都能说明问题吧，gus容易一点吧
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4楼2013-04-07 00:47:35
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wxf8470

木虫 (小有名气)
GUS恐怕不能看亚细胞定位
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5楼2013-04-07 09:49:10
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nfuyuer

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 夏尔list at 2013-04-07 00:47:35
都能说明问题吧，gus容易一点吧

我们实验室南瓜转化平台还没建立起来，然后听我一个实验室的同学说，如果用gus就必须要找到一对一的启动子序列。这一点是不是要自己现在NCBI数据库中查找啊？

以前没做过分子实验，这个原位杂交具体要学会哪些操作，那个荧光染料探针是找生物公司定制就可以了吧？生物材料培养室从田间拿来就可以做片观测了么？
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make·believe
6楼2013-04-07 11:45:38
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-04-09 07:41:52
如果要进行亚细胞定位的话，一般都是用GFP，而组织定位个人感觉GUS比较方便，染色之后普通显微镜下都可看不需要使用共聚焦！
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Tobeornottobe,that'saproblem
7楼2013-04-08 09:16:09
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spth2o

金虫 (小有名气)

教头

【答案】应助回帖

一般模式植物的研究两者都会采用，南瓜没有转化体系就不能够做GUS,只能做原位杂交来解决或者是免疫组化（需要抗体）。
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天道酬勤，水滴石穿！
8楼2013-10-12 21:15:46
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wxy20052002

木虫 (著名写手)
可以利用烟草叶片瞬间表达进行叶绿体定位研究A plastid envelope location of Arabidopsis ent-kaurene
oxidase links the plastid and endoplasmic reticulum steps
of the gibberellin biosynthesis pathway
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9楼2013-10-13 20:09:20
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