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gissingtan

新虫 (初入文坛)

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[求助] PCR结果很诡异百思不得其解求师兄师姐相助

刚开始做分子生物学实验这是提取的基因组DNA检测结果点样用1μl
下一张是PCR结果用的是上图提取的DNA 应该出现的片段是在一千与两千之间，接近进两千
想问为何在点样孔下出现那么多拖带现象 PCR的问题出在哪里
各位师兄师姐帮帮忙，我只有两个金币都给你了

提取的DNA.jpg

PCR结果.jpg

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1楼 2013-04-03 16:59:34

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tcgpinder

新虫 (初入文坛)

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专业: 作物种质资源与遗传育种学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gissingtan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-06 19:59:27
gissingtan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-07 17:34:30

1、你提取的基因组DNA质量不是很好，我们用CTAB法或SDS法提取（可加入RNase A进行消化RNA）的DNA质量都很好！（OD260/OD280在1.7-1.9之间，OD260/OD230大于2）另外提取基因组DNA的电泳胶图条带要清晰单一，没有降解，就像你跑Lamda DNA一样；另外，我觉得你提取的DNA样品中，含有大量的蛋白、多糖等杂质，没有用酚氯仿异戊醇萃取干净；
2、做PCR时，反应体系中，DNA的浓度最好在50-150ng/ul时，加0.5-1.5ul；另外，看看你设计引物的退火温度在多少（可以做一个梯度PCR找到合适的退火温度），预期目的片段大小是多少，以期设定退火温度和延伸时间；
3、看看你的胶孔有没有漏，还有就是琼脂糖胶均一不均一；
4、电泳的场压在3.5-8V/cm之间；
最后，希望你能找到原因，试验顺利！