应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 请教以基因组DNA为模板进行PCR的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 305  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【悬赏金币】回答本帖问题，作者heji将赠送您 3 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

heji

木虫 (初入文坛)

[求助] 请教以基因组DNA为模板进行PCR的问题

我前段时间提取了单只果蝇的基因组DNA（基因组DNA的质量已经电泳验证）。现在想PCR扩出其中某一基因的一段序列，大约600多bp，引物应该没有问题（设计引物时是根据基因组DNA设计的，并非根据mRNA）。退火温度从44度，一直到62度我都做了梯度PCR，但是一直都未出现条带。想请问高手们，是否在以基因组DNA为模板前要预先做某些处理呢？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2007-09-11 08:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heji

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wu2008yao at 2007-9-11 09:32 AM:
建议可以降低温度试试！
引物有多长？pcr体系如何？
还有你的程序也是有影响的？

温度我做过两次梯度PCR，退火温度分别从44度至51度，51度至62度。
上游引物为18bp
下游引物为20bp
PCR体系为：
Forward Primer                            1μl
Reverse Primer                            1μl
dNTPs(10mM)                          0.5μl
10×buffer(Mg2+ free)               2.5μl
Mgcl2                                      1.5μl
Taq                                         0.5μl
Template(genomic DNA)               4μl
ddH2O                                      14μl
Total           25μl
赞一下 回复此楼
3楼2007-09-11 09:46:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

wu2008yao

木虫 (小有名气)
★
heji(金币+1,VIP+0):谢谢
建议可以降低温度试试！
引物有多长？pcr体系如何？
还有你的程序也是有影响的？
赞一下(1人) 回复此楼
生命是一团欲望，欲望不满足便痛苦，满足便无聊。人生就在痛苦和无聊之间摇摆！
2楼2007-09-11 09:32:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

IDname

捐助贵宾 (正式写手)

钢虫
★
heji(金币+1,VIP+0):谢谢
什么叫做“引物应该没有问题”？
如果不好P就换引物。可以上网搜索一下别人克隆这个基因的时候都用过哪些引物？直接照抄一个。网上还有很多的引物设计的数据库可以参考。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2007-09-11 18:33:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heji

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by IDname at 2007-9-11 06:33 PM:
什么叫做“引物应该没有问题”？
如果不好P就换引物。可以上网搜索一下别人克隆这个基因的时候都用过哪些引物？直接照抄一个。网上还有很多的引物设计的数据库可以参考。

我之所以说引物没有问题，是因为我从cDNA里能扩增出相应的片段，而从基因组DNA里则不行。
另，该基因并无人登录全长至GenBank，目前仅有一个partial CDS，我现在是想在基因组DNA里验证一次，看能否在基因组DNA里扩增出该片段。
还请指教！谢谢！

[ Last edited by heji on 2007-9-11 at 19:15 ]
赞一下 回复此楼
5楼2007-09-11 19:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +9 辰沐5211314 2026-03-26 9/450 2026-03-29 01:12 by 我是小康
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +8 谷雨上岸 2026-03-23 9/450 2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 332求调剂 +6 蕉蕉123 2026-03-28 6/300 2026-03-29 00:37 by 544594351
[考研] 315求调剂 +4 akie... 2026-03-28 5/250 2026-03-28 21:05 by zhq0425
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 4/200 2026-03-28 14:30 by QiMing7
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +10 y7czhao 2026-03-26 10/500 2026-03-28 14:23 by 唐沐儿
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +7 hanamiko 2026-03-27 7/350 2026-03-28 09:56 by 李上岸0921
[考研] 求调剂 +8 张zz111 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:41 by fmesaito
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 312求调剂 +9 上岸吧ZJY 2026-03-22 13/650 2026-03-27 11:24 by sanrepian
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭