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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 噬菌体透射电镜负染照片
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badi777

铁虫 (初入文坛)

[交流] 噬菌体透射电镜负染照片

环境工程的基础，最近要做噬菌体分离实验，完全是门外汉，步履维艰！
我是从沉积物中分离和纯化微生物和相应的噬菌体。
筛选分离噬菌体后，PTA复染后透射电镜下的照片总不是能够很好滴解释。请教达人给指点一二，不胜感激！
如下图1 和图2 应该是获得的较好的复染照片


然而这样的照片在视野中并不是普遍地现象，普遍出现的是如图3右上角部位大量类似碎片状的形态，但是偶尔观察它们又都有一下球状的表征。见图4


求高人指点一下，这些都是什么，哪些才是我想要的东西！！！！
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1楼 2013-04-03 11:18:25
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ycczy111

金虫 (正式写手)
★
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我怎么感觉图一二不像是噬菌体    形态不规则啊
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2楼2013-04-03 17:47:21
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badi777

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ycczy111 at 2013-04-03 17:47:21
我怎么感觉图一二不像是噬菌体    形态不规则啊

那图4里面的东西呢？我从环境中富集分离，也不知道它们长什么样子。图4里面的东西怎么解释
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3楼2013-04-03 19:19:55
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dorecnu

木虫 (正式写手)
★
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问题的关键不在电镜照片上，我觉得噬菌体的分离是最关键的一步。
分离噬菌体可以用双层平板法，见到噬菌斑后将噬菌体扩大培养，再用透射电镜观察，一般可获得清晰的图片
基于以下的几点我认为楼主观察的样品非噬菌体：1.没有头尾结构；2.不像覆盖层科的病毒有明显的荚膜结构；3.不同视野看到的噬菌体形态不一样。
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4楼2013-04-03 20:28:38
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redbull2011

捐助贵宾 (正式写手)
★
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看上去所有图片中都没有典型的噬菌体结构
那种大片大片的结构，很有可能是噬菌体溶液中的杂质，电镜下的噬菌体不可能有那么高的浓度。样品做电镜前纯化了没有？
楼主现在的问题是样品中噬菌体的浓度太低和纯化问题，多取点样品吧，富集一下
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5楼2013-04-03 22:44:41
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cloudwin

金虫 (小有名气)
★
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先要做样品纯化，不然显微照片下的假象很容易产生误解。
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6楼2013-04-03 22:59:52
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badi777

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dorecnu at 2013-04-03 20:28:38
问题的关键不在电镜照片上，我觉得噬菌体的分离是最关键的一步。
分离噬菌体可以用双层平板法，见到噬菌斑后将噬菌体扩大培养，再用透射电镜观察，一般可获得清晰的图片
基于以下的几点我认为楼主观察的样品非噬菌 ...

多谢3楼的意见。我也是处在初步的分离阶段，双层平板效果不好，心里着急就直接拿到电镜下面去观察了。看来还是我最初的工作没有做好，造成这样的问题。
双层平板实验并不是每次都能得到较清晰的噬菌斑，时有时无的……
另外我用的宿主也是我在做噬菌体的样品中分离得到的一种细菌，还未鉴定。在平板上生长时总出现这样的现象，涂布后培养24小时，菌斑中心就会变空（下图），不知道这是什么样的原因。
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7楼2013-04-05 15:14:25
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badi777

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by redbull2011 at 2013-04-03 22:44:41
看上去所有图片中都没有典型的噬菌体结构
那种大片大片的结构，很有可能是噬菌体溶液中的杂质，电镜下的噬菌体不可能有那么高的浓度。样品做电镜前纯化了没有？
楼主现在的问题是样品中噬菌体的浓度太低和纯化问题 ...

多谢回复！
前面样品并没有纯化，直接将裂解产物离心后取的上清液制样观察的。
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8楼2013-04-05 15:16:34
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蔻拉bear

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by redbull2011 at 2013-04-03 22:44:41
看上去所有图片中都没有典型的噬菌体结构
那种大片大片的结构，很有可能是噬菌体溶液中的杂质，电镜下的噬菌体不可能有那么高的浓度。样品做电镜前纯化了没有？
楼主现在的问题是样品中噬菌体的浓度太低和纯化问题 ...

您好，我现在要做噬菌体的电镜观察。我已经把噬菌斑纯化了5次，想咨询您我的噬菌斑现在在平板上，我想要电镜观察的话需要怎么处理一下呢？谢谢
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9楼2018-11-12 15:45:16
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