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badi777

铁虫 (初入文坛)

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[交流] 噬菌体透射电镜负染照片

环境工程的基础，最近要做噬菌体分离实验，完全是门外汉，步履维艰！
我是从沉积物中分离和纯化微生物和相应的噬菌体。
筛选分离噬菌体后，PTA复染后透射电镜下的照片总不是能够很好滴解释。请教达人给指点一二，不胜感激！
如下图1 和图2 应该是获得的较好的复染照片

然而这样的照片在视野中并不是普遍地现象，普遍出现的是如图3右上角部位大量类似碎片状的形态，但是偶尔观察它们又都有一下球状的表征。见图4

求高人指点一下，这些都是什么，哪些才是我想要的东西！！！！

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1楼 2013-04-03 11:18:25

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badi777

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

4楼: Originally posted by dorecnu at 2013-04-03 20:28:38
问题的关键不在电镜照片上，我觉得噬菌体的分离是最关键的一步。
分离噬菌体可以用双层平板法，见到噬菌斑后将噬菌体扩大培养，再用透射电镜观察，一般可获得清晰的图片
基于以下的几点我认为楼主观察的样品非噬菌 ...

多谢3楼的意见。我也是处在初步的分离阶段，双层平板效果不好，心里着急就直接拿到电镜下面去观察了。看来还是我最初的工作没有做好，造成这样的问题。
双层平板实验并不是每次都能得到较清晰的噬菌斑，时有时无的……
另外我用的宿主也是我在做噬菌体的样品中分离得到的一种细菌，还未鉴定。在平板上生长时总出现这样的现象，涂布后培养24小时，菌斑中心就会变空（下图），不知道这是什么样的原因。