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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR与普通PCR
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-04 13:41:18
做定量的话引物要求不能形成二聚体，因为引物二聚体也会发荧光，影响定量。而且引物二聚体的形成也会影响PCR的扩增效率。...

那你做过miRNA吗？知道植物miRNA的内参基因用什么吗？很多人说动植物通用U6，但是也有人说要用5S，我现在查不到关于5S的文献。还有，我现在PCR遇到的问题是，一个引物在一个模板PCR的时候挺好的，但是换了模板就效果不好了
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如果不努力，肯定没收获！
11楼2013-04-04 16:22:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
没入尘埃5(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-29 14:30:18
引用回帖:
11楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2013-04-04 16:22:26
那你做过miRNA吗？知道植物miRNA的内参基因用什么吗？很多人说动植物通用U6，但是也有人说要用5S，我现在查不到关于5S的文献。还有，我现在PCR遇到的问题是，一个引物在一个模板PCR的时候挺好的，但是换了模板就效 ...

我没做过miRNA，不知道用什么内参。总的来说，内参不是唯一的，关键是针对你要比较的基因各个样品之间内参的表达需要恒定。这个主要看发表的文章和自己的实验。至于PCR模板不同效果不同的问题，我想可能是模板质量问题或者是引物特异性问题。
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12楼2013-04-05 00:20:04
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froess

新虫 (初入文坛)
★
没入尘埃5(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-29 14:30:27
引用回帖:
11楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2013-04-04 16:22:26
那你做过miRNA吗？知道植物miRNA的内参基因用什么吗？很多人说动植物通用U6，但是也有人说要用5S，我现在查不到关于5S的文献。还有，我现在PCR遇到的问题是，一个引物在一个模板PCR的时候挺好的，但是换了模板就效 ...

植物或动物的miRNA内参一般情况下可以选择U6，如果不确定可以选择一些试剂公司直接设计引物，并且会推荐一些内参给你。目前，看这个溶解曲线貌似不太理想，引物还是很关键的，建议重新设计。
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13楼2013-04-16 19:15:10
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