24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1674  |  回复: 7

yhdchina

新虫 (初入文坛)

[交流] 请圆二色谱仪高手指点已有2人参与

我要做一个多肽药物的结构,39个氨基酸。先用圆二色谱做二级结构,再用核磁共振做三级结构。请问用圆二色谱,对样品有什么要求,比如:浓度、纯度、一次要多大量等等。谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjlqingdao

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
您是做固体CD还是液体CD?
2楼2013-04-02 08:48:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhdchina

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zjlqingdao at 2013-04-02 08:48:44
您是做固体CD还是液体CD?

你好!液体CD,在EK酶缓冲液中的。
3楼2013-04-02 09:11:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjlqingdao

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yhdchina at 2013-04-02 09:11:43
你好!液体CD,在EK酶缓冲液中的。...

那浓度要保证CD的紫外的吸收在0-3之间即可!纯度那肯定越纯越好!
4楼2013-04-03 08:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

e2zhanbo

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
测二级结构,通常波长范围在180-260nm,建议先用1mm光程的干净的比色皿;
纯度建议在95%以上;

浓度要通过紫外吸收调整,在波长范围内峰值处的吸收最好在0.5-2.0之间;
同时要尽量降低EK酶的吸收,越小越好;

如果是1mm比色皿,其容积是300ul,加样200ul 就足够,加上操作中损耗,可以预估
5楼2013-04-03 12:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhdchina

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by e2zhanbo at 2013-04-03 12:00:16
测二级结构,通常波长范围在180-260nm,建议先用1mm光程的干净的比色皿;
纯度建议在95%以上;

浓度要通过紫外吸收调整,在波长范围内峰值处的吸收最好在0.5-2.0之间;
同时要尽量降低EK酶的吸收,越小越好; ...

谢谢!我看文献有far-UV和near-UV,分别用1-mm light path length and a 10-mm light path length 测量,型号是 Jasco J-810 ,什么意思啊。终浓度分别是15和150μM,样品量分别为多少没说,知道多少吗?谢谢!
6楼2013-04-03 15:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

e2zhanbo

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Far-UV远紫外区波长范围180-260nm,吸收较强,所以选用较小光程的比色皿,如1mm或0.5mm;比尔定律
Near-UV近紫外区波长范围260-320nm,吸收比较弱,通常用大光程比色皿,10mm,相应也会提升浓度;
F-UV反映二级结构信息,N-UV反映侧链三级结构信息;
light Pathlength实际上就是装样品的石英比色皿规格,样品在仪器光路上的厚度
如果是Hellma的比色皿,1mm池子 容积300ul  ;10mm 容积 3ml  ;装样到高度一半以上就可以
至于你是用日本Jasco还是英国Applied Photophysics的Chirascan做实验,客观结果是一直的

[ Last edited by e2zhanbo on 2013-4-4 at 08:48 ]
7楼2013-04-04 08:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhdchina

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by e2zhanbo at 2013-04-04 08:43:58
Far-UV远紫外区波长范围180-260nm,吸收较强,所以选用较小光程的比色皿,如1mm或0.5mm;比尔定律
Near-UV近紫外区波长范围260-320nm,吸收比较弱,通常用大光程比色皿,10mm,相应也会提升浓度;
F-UV反映二级结 ...

非常感谢!
8楼2013-04-04 09:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yhdchina 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见