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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请圆二色谱仪高手指点
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yhdchina

新虫 (初入文坛)

[交流] 请圆二色谱仪高手指点 已有2人参与

我要做一个多肽药物的结构，39个氨基酸。先用圆二色谱做二级结构，再用核磁共振做三级结构。请问用圆二色谱，对样品有什么要求，比如：浓度、纯度、一次要多大量等等。谢谢！
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1楼 2013-04-01 15:27:23
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zjlqingdao

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您是做固体CD还是液体CD？
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2楼2013-04-02 08:48:44
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yhdchina

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zjlqingdao at 2013-04-02 08:48:44
您是做固体CD还是液体CD？

你好！液体CD,在EK酶缓冲液中的。
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3楼2013-04-02 09:11:43
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zjlqingdao

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yhdchina at 2013-04-02 09:11:43
你好！液体CD,在EK酶缓冲液中的。...

那浓度要保证CD的紫外的吸收在0-3之间即可！纯度那肯定越纯越好！
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4楼2013-04-03 08:37:40
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e2zhanbo

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
测二级结构，通常波长范围在180－260nm，建议先用1mm光程的干净的比色皿；
纯度建议在95%以上；

浓度要通过紫外吸收调整，在波长范围内峰值处的吸收最好在0.5－2.0之间；
同时要尽量降低EK酶的吸收，越小越好；

如果是1mm比色皿，其容积是300ul，加样200ul 就足够，加上操作中损耗，可以预估
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5楼2013-04-03 12:00:16
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yhdchina

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by e2zhanbo at 2013-04-03 12:00:16
测二级结构，通常波长范围在180－260nm，建议先用1mm光程的干净的比色皿；
纯度建议在95%以上；

浓度要通过紫外吸收调整，在波长范围内峰值处的吸收最好在0.5－2.0之间；
同时要尽量降低EK酶的吸收，越小越好； ...

谢谢！我看文献有far-UV和near-UV，分别用1-mm light path length and a 10-mm light path length 测量，型号是 Jasco J-810 ，什么意思啊。终浓度分别是15和150μM，样品量分别为多少没说，知道多少吗？谢谢！
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6楼2013-04-03 15:54:01
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e2zhanbo

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Far-UV远紫外区波长范围180-260nm，吸收较强，所以选用较小光程的比色皿，如1mm或0.5mm；比尔定律
Near-UV近紫外区波长范围260－320nm，吸收比较弱，通常用大光程比色皿，10mm，相应也会提升浓度；
F-UV反映二级结构信息，N-UV反映侧链三级结构信息；
light Pathlength实际上就是装样品的石英比色皿规格，样品在仪器光路上的厚度
如果是Hellma的比色皿，1mm池子 容积300ul  ；10mm 容积 3ml  ；装样到高度一半以上就可以
至于你是用日本Jasco还是英国Applied Photophysics的Chirascan做实验，客观结果是一直的

[ Last edited by e2zhanbo on 2013-4-4 at 08:48 ]
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7楼2013-04-04 08:43:58
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yhdchina

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by e2zhanbo at 2013-04-04 08:43:58
Far-UV远紫外区波长范围180-260nm，吸收较强，所以选用较小光程的比色皿，如1mm或0.5mm；比尔定律
Near-UV近紫外区波长范围260－320nm，吸收比较弱，通常用大光程比色皿，10mm，相应也会提升浓度；
F-UV反映二级结 ...

非常感谢！
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8楼2013-04-04 09:10:08
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