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zouchuwuyan

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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在线: 2.2小时
虫号: 2089961
注册: 2012-10-27
专业: 黏膜免疫学

[求助] pet28a双酶切出现这种情况

pet28a双酶切以后出现这种情况，怎么回事？
1和2是用bamH1和xho1切的，3和4是用bamH1和Hind3切的，求解，谢谢大家。

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1楼 2013-03-31 23:12:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jk_xdx

银虫 (小有名气)

应助: 8 (幼儿园)
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红花: 1
帖子: 85
在线: 52.8小时
虫号: 841409
注册: 2009-09-05
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

可能是酶切体系有问题,建议把体系和条件贴出来.
需要注意的是: BamH I 高甘油浓度、Mn2+存在、低离子强度条件下，识别序列会发生变化。
因此给你的建议:
1 , 建议分步酶切;
2 , 如果双酶切, 为减少高甘油浓度的影响, 请加大体系的体积, 减少酶的用量 ,30度过夜酶切
相信不会有问题