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pet28a双酶切出现这种情况
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zouchuwuyan
新虫
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专业: 黏膜免疫学
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pet28a双酶切出现这种情况
pet28a双酶切以后出现这种情况,怎么回事?
1和2是用bamH1和xho1切的,3和4是用bamH1和Hind3切的,求解,谢谢大家。
图片2.png
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1楼
2013-03-31 23:12:51
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jk_xdx
银虫
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专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
可能是酶切体系有问题,建议把体系和条件贴出来.
需要注意的是: BamH I 高甘油浓度、Mn2+存在、低离子强度条件下,识别序列会发生变化。
因此给你的建议:
1 , 建议分步酶切;
2 , 如果双酶切, 为减少高甘油浓度的影响, 请加大体系的体积, 减少酶的用量 ,30度过夜酶切
相信不会有问题
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11楼
2013-04-02 10:24:55
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cicelyzh
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专业: 生物化学
【答案】应助回帖
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zouchuwuyan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助!
2013-04-27 18:13:20
感觉你的酶有问题,单酶切就出现那么多条带。检查一下质粒用量、酶的用量、buffer什么的。
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zouchuwuyan
2楼
2013-04-01 00:31:35
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jjg0912
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性别: GG
专业: 生物信息学
【答案】应助回帖
★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助!
2013-04-27 18:13:35
建议你去看看这个载体的酶切图谱,有这样的软件,你可以得到酶切后的片段,包括片段的数量以及大小。这样你以后做酶切实验就可以有的放矢了。
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3楼
2013-04-01 06:22:17
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zouchuwuyan
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专业: 黏膜免疫学
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2楼
:
Originally posted by
cicelyzh
at 2013-04-01 00:31:35
感觉你的酶有问题,单酶切就出现那么多条带。检查一下质粒用量、酶的用量、buffer什么的。
是双酶切,1,2都是bamH1和xho1双酶切,3,4都是用bamH1和Hind3双酶切。切开之后反而跑的快了。
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4楼
2013-04-01 09:22:52
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