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YHWS-441

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR和电泳

我想请教下各位前辈，我最近在做PCR，反应完成后，进行琼脂糖凝胶电泳，但是跑出来目的条带比预计的目的条带要长，这是怎么回事呢？应该如何避免？
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1楼 2013-03-31 15:58:26
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在水1方

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提取出的质粒浓度怎么样，你的上样量是多少？可能使你上样量多的缘故吧。
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2楼2013-03-31 21:07:08
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xy656691

金虫 (正式写手)
把电泳图发上来看看才好说明具体是哪的问题
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3楼2013-03-31 22:05:24
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YHWS-441

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 在水1方 at 2013-03-31 21:07:08
你提取出的质粒浓度怎么样，你的上样量是多少？可能使你上样量多的缘故吧。

我才刚刚跑电泳，没有到提取质粒这一步，
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4楼2013-04-02 08:17:57
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YHWS-441

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 在水1方 at 2013-03-31 21:07:08
你提取出的质粒浓度怎么样，你的上样量是多少？可能使你上样量多的缘故吧。

图片如下

13.3.28.jpg
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5楼2013-04-02 08:20:50
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好好后生

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by YHWS-441 at 2013-04-02 08:20:50
图片如下

13.3.28.jpg
...

最左边是marker的话。。。这明明是最短，是没P出来啊
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6楼2013-04-02 15:14:43
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牧歌ping

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
YHWS-441(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-26 21:19:48
gyesang: 回帖置顶 2013-04-26 21:19:54
泳道最前面的亮团小于200bp，应该是引物二聚体，你没P出来，先检查下你设计的引物吧，然后调整下退火温度，再重新扩增试试
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7楼2013-04-02 15:40:47
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:48:20
引用回帖:
5楼: Originally posted by YHWS-441 at 2013-04-02 08:20:50
图片如下

13.3.28.jpg
...

最低的带是引物二聚体，不是你所需要的目的带，建议检查体系，进行温度梯度PCR
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8楼2013-04-02 18:51:12
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YHWS-441

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 84146922 at 2013-04-02 18:51:12
最低的带是引物二聚体，不是你所需要的目的带，建议检查体系，进行温度梯度PCR...

谢谢，我想请问一下，怎样来分辨自己跑出来的条带是目的基因还是引物二聚体呢？
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9楼2013-04-03 07:57:56
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84146922

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by YHWS-441 at 2013-04-03 07:57:56
谢谢，我想请问一下，怎样来分辨自己跑出来的条带是目的基因还是引物二聚体呢？...

二聚体一般在泳道最下面，而且比较弥散~
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10楼2013-05-31 21:04:29
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