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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » EMSA没有条带
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无为书生

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10楼: Originally posted by lily7a26 at 2013-03-29 22:17:52
我决定下周按你说的直接点膜试试看，其实昨晚我想这么做来的，但是又没做过，不知道这样行不行，所以来求助，期待有结果啊...

这样做只是类似于阳性对照，看看你的生物素和亲和素到底能不能反应，我以前遇到过反应比较弱的现象。祝你实验顺利！
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11楼2013-03-30 08:42:53
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lchxia2001

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-02 02:17:14
我做过EMSA，用的是同位素，结果比较成功，所有的操作都是模拟DNA和蛋白质互作的生理条件进行的，DNA和蛋白质结合是在冰浴条件下，电泳条件温度不能超过16度，电泳速度也不能过快，否则蛋白和DNA都在点样孔滞留下不来。
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12楼2013-04-02 19:42:49
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匿名

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13楼2013-04-16 09:18:40
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无为书生

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12楼: Originally posted by lchxia2001 at 2013-04-02 19:42:49
我做过EMSA，用的是同位素，结果比较成功，所有的操作都是模拟DNA和蛋白质互作的生理条件进行的，DNA和蛋白质结合是在冰浴条件下，电泳条件温度不能超过16度，电泳速度也不能过快，否则蛋白和DNA都在点样孔滞留下不 ...

"所有的操作都是模拟DNA和蛋白质互作的生理条件进行的，DNA和蛋白质结合是在冰浴条件下"这是不是有矛盾？
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14楼2013-04-16 09:32:00
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无为书生

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13楼: Originally posted by lily7a26 at 2013-04-16 09:18:40
我昨天又做了一次，蛋白加到10ug了，没有条带，直接点膜都没有。这种情况是二抗的问题比较大还是生物素探针呢?...

不知道你是怎么做的，生物素和链霉亲和素反应不涉及二抗，更谈不上二抗的问题，如果你的连霉亲和素标的是HRP，直接用DAB显色就可以了。
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15楼2013-04-16 09:36:23
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匿名

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16楼2013-04-16 11:17:12
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haiven

捐助贵宾 (著名写手)
国内做EMSA都用生物素吗？为什么不用p32同位素呢？没有条件，还是怕辐射？不大明白。用生物素还要用杂交放大信号，是不是更麻烦了。
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走进你，温暖我，迷失于这个世界！
17楼2013-05-17 00:52:21
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匿名

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18楼2013-05-17 09:30:26
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