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晏育伟

铜虫 (初入文坛)


[求助] RT-PCR问题

寄生虫的某目的基因的表达量较低,在28左右,为验证其在组织中不同时期的表达量差异,设计RT-PCR实验。共提了6管RNA,1、2两管是直接从寄生虫中提取,3、4、5、6是从感染了此种寄生虫的动物组织中提取;SYBR荧光定量PCR两步法时,1、2样品的扩增曲线和溶解曲线良好,可是3、4、5、6却不行;怀疑是样品有问题,以cDNA为模板,用RT-PCR引物做普通PCR,能扩增出特异性条带,无引物二聚体。请问我这实验可能是哪里出问题了呢?谢谢各位了!
PS:附上图片,请大家帮忙分析分析。
说明一下:扩增曲线,前面四条是1、2两样品的目的基因;后面四条是1、2两样品的内参基因的。(每个样品做了两个重复)
电泳图:1-6泳道是目的基因,7为水对照,8-13为内参基因。

扩增曲线.jpg



溶解曲线.jpg



电泳图.jpg
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