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zdx516

铁虫 (小有名气)

[求助] overlap 三个片段做不出来,重新设计了引物,用两个片段融合也做不出来

之前我是三个片段的overlap,没成功,我重新设计了引物,改成两个片段的,这是我的引物:

Z- U-F引物1:

AACTGCAGTTAAAGAGGAGGTAAAAATGAC   

Z-U-R引物2:

CTCGAGACCATATCCTACTGTTGCTATAA

Z- D-F上游

ATAGCAACAGTAGGATATGGTCTCGAGCAAAAACTACAACGAGATTATACTG

Z- D-R下游

GGGGTACCAGTTCCGGCTGTTGATG   

蓝色的部分是overlap部分,下划线是酶切位点和保护碱基。但是我还是做不出来,各位大侠,帮帮忙,谢谢!
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sunbeartao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引物没什么问题,片段数量,最好是总量为800ng左右,第一次不加引物的PCR结束后有没有跑胶看看有没有融上?有条带了再进行下一步PCR
22
2楼2013-06-01 18:52:22
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