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haylinsmile

银虫 (小有名气)

[求助] 做MTT实验 细胞铺板总是不均匀 有何良方解决 已有2人参与

如题~  MTT铺板总是铺不好,而且感觉细胞计数板得到的细胞数也和真实值差距很大。。。  有什么铺板的诀窍么  跪求啊
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萍萍-2011

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
haylinsmile: 金币+1, 有帮助 2013-03-28 12:38:32
没有技巧。。但可以给你建议
1  若是贴壁细胞,你首先要把细胞消化,然后完全吹打成细胞混悬液,在用细胞板计数,计数板上的细胞液不要滴的太多
2  计数完后,根据你需要的浓度在离心管稀释就好了。一定要把细胞吹打混匀再加入加样槽中
3  用排枪快速加入你所需要的板(如96孔板)中,如果你刚开始速度慢,你可以采用每加两排就来回轻轻晃晃加样槽再继续向96孔板中铺板。
4  加MTT时,你的手不能抖,要垂直悬空全部加入
5  这个需要多练。。我刚开始也是做的不好。。做多了。。就会好些。。。加油吧。。祝你成功
3楼2013-03-27 17:27:03
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anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
haylinsmile: 金币+1, 有帮助 2013-03-28 12:38:25
铺板没有诀窍,只有信息和专一,手不要抖,针头要对准孔壁,全部加完,要混合均匀,是自己操作细节问题,好好想想。
精益求精
2楼2013-03-27 14:37:57
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wq0616

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
haylinsmile: 金币+1, 有帮助 2013-03-28 12:38:44
铺板计数之前,把离心管盖上盖子,稍稍混匀,然后计数。在加96孔板的前也要混匀几次,铺的时候,每隔几个混匀一下,可能会好点。铺不均匀很正常,多练几次,有手感就好了。加油!
艰难困苦,玉汝于成。
4楼2013-03-27 18:31:12
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帽子shine

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 萍萍-2011 at 2013-03-27 17:27:03
没有技巧。。但可以给你建议
1  若是贴壁细胞,你首先要把细胞消化,然后完全吹打成细胞混悬液,在用细胞板计数,计数板上的细胞液不要滴的太多
2  计数完后,根据你需要的浓度在离心管稀释就好了。一定要把细胞吹 ...

是要悬空加入吗?我都是稍微贴点壁加的,也挺均匀的,做出的曲线很好。。。
5楼2013-04-03 14:48:26
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