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haylinsmile

银虫 (小有名气)

[求助] 做MTT实验 细胞铺板总是不均匀 有何良方解决 已有2人参与

如题~  MTT铺板总是铺不好,而且感觉细胞计数板得到的细胞数也和真实值差距很大。。。  有什么铺板的诀窍么  跪求啊
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anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
haylinsmile: 金币+1, 有帮助 2013-03-28 12:38:25
铺板没有诀窍,只有信息和专一,手不要抖,针头要对准孔壁,全部加完,要混合均匀,是自己操作细节问题,好好想想。
精益求精
2楼2013-03-27 14:37:57
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萍萍-2011

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
haylinsmile: 金币+1, 有帮助 2013-03-28 12:38:32
没有技巧。。但可以给你建议
1  若是贴壁细胞,你首先要把细胞消化,然后完全吹打成细胞混悬液,在用细胞板计数,计数板上的细胞液不要滴的太多
2  计数完后,根据你需要的浓度在离心管稀释就好了。一定要把细胞吹打混匀再加入加样槽中
3  用排枪快速加入你所需要的板(如96孔板)中,如果你刚开始速度慢,你可以采用每加两排就来回轻轻晃晃加样槽再继续向96孔板中铺板。
4  加MTT时,你的手不能抖,要垂直悬空全部加入
5  这个需要多练。。我刚开始也是做的不好。。做多了。。就会好些。。。加油吧。。祝你成功
3楼2013-03-27 17:27:03
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wq0616

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
haylinsmile: 金币+1, 有帮助 2013-03-28 12:38:44
铺板计数之前,把离心管盖上盖子,稍稍混匀,然后计数。在加96孔板的前也要混匀几次,铺的时候,每隔几个混匀一下,可能会好点。铺不均匀很正常,多练几次,有手感就好了。加油!
艰难困苦,玉汝于成。
4楼2013-03-27 18:31:12
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帽子shine

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 萍萍-2011 at 2013-03-27 17:27:03
没有技巧。。但可以给你建议
1  若是贴壁细胞,你首先要把细胞消化,然后完全吹打成细胞混悬液,在用细胞板计数,计数板上的细胞液不要滴的太多
2  计数完后,根据你需要的浓度在离心管稀释就好了。一定要把细胞吹 ...

是要悬空加入吗?我都是稍微贴点壁加的,也挺均匀的,做出的曲线很好。。。
5楼2013-04-03 14:48:26
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考研水平

新虫 (初入文坛)

我最近也在做细胞接板实验,是用来做cck-8的,也遇到了同样的问题,细胞接板不均匀,计数板每次记的数也相差很大,感觉计数板非常不好用,想必过了这么久,前辈已经达到炉火纯青的地步了吧!跪求前辈指导。
6楼2013-10-12 15:49:17
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玻璃微球

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


karl2100: 金币+1, 多谢指教! 2013-10-13 00:30:48
1.计数前的细胞悬液一定要混匀
2.铺细胞时,无论是你用加样槽还是培养皿加细胞,一定要边加边混匀
3.要根据你的细胞的生长速度和细胞大小选择每个孔铺的细胞数
比如我铺231时,每孔加3000个细胞,而铺细胞个头比较小,生长速度慢一些的HELA时就加4000个了~

最重要的是,要多练习~没啥技巧,熟能生巧~
祝你好运~
7楼2013-10-12 19:31:49
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小走路

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我是美加一排孔之前均用枪吹混细胞悬液,然后再逐排加,但是出来的效果还不是很好!看贴着说要把枪头贴在孔壁上加,不晓得效果怎么样,打算试试~
如果一切都过去了,那么跳舞吧!要什么完美,放过了自己才能高飞~
8楼2014-03-08 09:01:42
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jinhua0427

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

细胞离心后,要充分吹打,而且,在接96孔板的时候,最好是把细胞放在培养皿中,培养皿面积大,排枪吸溶液比较快,每加过几排就要吹打培养皿中的细胞,尤其是细胞密度较大的时候。
祝好运了。
9楼2014-05-08 10:07:14
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