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浪漫的马

新虫 (初入文坛)

[求助] WB做不出来

小虫做WB已经快半年了,但是一直没做出来,蛋白是从MCF-7和HepG-2提取的,我接的一抗是胰岛素受体,出来的条带始终是模模糊糊的,请高手指点。
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dengqiong301

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
浪漫的马: 金币+2, ★有帮助 2013-03-28 16:50:19
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:09:33
浪漫的马: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-17 11:45:34
首先还是从技术上去找问题,可以直接把提取的蛋白跑个胶,用考马斯亮蓝染下看看条带如何。
也有可能目的蛋白比较容易降解,所以最好加一定量的蛋白酶抑制剂。
acting其实是actin,一种常见内参,内参表达量而且稳定,所以会比较好检测。内参必须是比较明显清晰。
我们用的都是比较好的抗体,santa cruze或者millipore、abCam等
另外对于你研究的蛋白不懂,会不会有其他亚型,或者修饰,造成条带模糊,可以查询相关文献,祝好运
10楼2013-03-28 01:40:00
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查看全部 18 个回答

peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
浪漫的马: 金币+2, ★有帮助 2013-03-25 18:13:28
有没有染其他的,像内参抗体,确定是不是技术问题。不是,那就是这个一抗有问题了,换一个试试了
2楼2013-03-25 16:51:29
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浪漫的马

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-25 16:51:29
有没有染其他的,像内参抗体,确定是不是技术问题。不是,那就是这个一抗有问题了,换一个试试了

可是有条带,就是不清楚,难道大分子的就不太还接?我接下来再染个内参试试。
3楼2013-03-25 18:05:39
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浪漫的马

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 浪漫的马 at 2013-03-25 18:05:39
可是有条带,就是不清楚,难道大分子的就不太还接?我接下来再染个内参试试。...

今天接了个内参抗体,有条带,非常的明显,能确定是一抗的问题吗,各位虫友,你们接大分子的一抗好接吗,都用的那个公司的一抗呀?
4楼2013-03-26 17:02:51
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