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浪漫的马

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 748.5
帖子: 18
在线: 143.3小时
虫号: 1761362
注册: 2012-04-17
性别: GG
专业: 生物无机化学

[求助] WB做不出来

小虫做WB已经快半年了，但是一直没做出来，蛋白是从MCF-7和HepG-2提取的，我接的一抗是胰岛素受体，出来的条带始终是模模糊糊的，请高手指点。

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1楼 2013-03-25 15:35:52

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

dengqiong301

木虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1774.7
散金: 980
红花: 4
帖子: 172
在线: 104.6小时
虫号: 1414609
注册: 2011-09-23
性别: GG
专业: 发育生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
浪漫的马: 金币+2, ★有帮助 2013-03-28 16:50:19
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:09:33
浪漫的马: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-17 11:45:34

首先还是从技术上去找问题，可以直接把提取的蛋白跑个胶，用考马斯亮蓝染下看看条带如何。
也有可能目的蛋白比较容易降解，所以最好加一定量的蛋白酶抑制剂。
acting其实是actin，一种常见内参，内参表达量而且稳定，所以会比较好检测。内参必须是比较明显清晰。
我们用的都是比较好的抗体，santa cruze或者millipore、abCam等
另外对于你研究的蛋白不懂，会不会有其他亚型，或者修饰，造成条带模糊，可以查询相关文献，祝好运