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nandalina

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于用lip2000瞬时转染mcf-7/adr 细胞的问题 已有1人参与

最近用lipo2000转染mcf-7/adr细胞,转染质粒后测启动子活性,以β-gal来矫正转染效率。但是负对照出现了β-gal活性很低的问题,实验组正常。重复了几次,问题还是存在,不知道什么原因,很着急!望了解的虫友给予帮助,万分感谢!!
                      PGL3             MDR1        MRP1        BCRP
        luc          62        11819        3692        918
               β-gal        0.173        0.336        0.28        0.297
        校正β-gal  0.165     0.328        0.272        0.289
        校正luc        375.7575758  36033.53659        13573.52941        3176.470588
        激活倍数        1                    95.89570219         36.12310246        8.453510435
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

MCF-7细胞做瞬转相对比较好做,lipo2000b个人不建议使用,Lipo2000细胞毒性略大,容易导致转染后细胞大量死亡,相比而言我们现在的BIODAI对细胞几乎没有毒性,在转染后也不需要更换培养液
3楼2020-05-25 09:28:48
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czbd2016

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by nandalina at 2013-03-25 11:10:15
最近用lipo2000转染mcf-7/adr细胞,转染质粒后测启动子活性,以β-gal来矫正转染效率。但是负对照出现了β-gal活性很低的问题,实验组正常。重复了几次,问题还是存在,不知道什么原因,很着急!望了解的虫友给予帮 ...

我个人认为是转染试剂出现了问题,可能是你们实验组使用的转染试剂的细胞毒性偏高,我们前一段时间用的RFect转染试剂,用下来效果还不错,主要是细胞转阳性率高,另外就是细胞毒性小。
2楼2018-11-21 15:18:27
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