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青青一麦

铜虫 (正式写手)

[求助] 福林酚法测定酸性和中性蛋白酶

用福林酚法测定冬虫夏草菌粉中的酸性蛋白酶和中性蛋白酶活性,所有步骤都按文献操作,试剂的配置都是参考了很多文献,为什么做了好几遍就是不显色呢?该开始有点淡淡的蓝色,40摄氏度保温显色 就直接变成物色,问题出在哪了?福林酚试剂是自己制的,为黄绿色,按1:3稀释使用,酸性蛋白缓冲液为3.0乳酸缓冲液,中性用PH7.5的磷酸缓冲液。
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快乐每天
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青青一麦

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 0203080204 at 2013-04-12 09:15:06
样品得确定合适的稀释倍数,稀释倍数过高,看起来就不显色了。。

我的样品直接没稀释,用原液测得,但是 如果如果将原液放置一定时间之后显色非常深,不知道怎么回事
快乐每天
6楼2013-04-26 21:17:24
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xiaoer0330

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励新虫应助! 2013-04-11 17:19:57
显色之前是绿色,显色结束以后该是蓝色,我们的福林酚是Sigma的 其本身的颜色也是淡淡的荧光黄色
2楼2013-04-11 11:19:34
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0203080204

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

样品得确定合适的稀释倍数,稀释倍数过高,看起来就不显色了。。
3楼2013-04-12 09:15:06
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junmove

铜虫 (小有名气)

我最近也在做蛋白酶的活性,将前人做过的已知有活性的及自己的,测活性都测不出来。不知道什么原因
4楼2013-04-26 15:58:53
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