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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 福林酚法测定酸性和中性蛋白酶
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青青一麦

铜虫 (正式写手)

[求助] 福林酚法测定酸性和中性蛋白酶

用福林酚法测定冬虫夏草菌粉中的酸性蛋白酶和中性蛋白酶活性，所有步骤都按文献操作，试剂的配置都是参考了很多文献，为什么做了好几遍就是不显色呢？该开始有点淡淡的蓝色，40摄氏度保温显色 就直接变成物色，问题出在哪了？福林酚试剂是自己制的，为黄绿色，按1:3稀释使用，酸性蛋白缓冲液为3.0乳酸缓冲液，中性用PH7.5的磷酸缓冲液。
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快乐每天
1楼 2013-03-22 16:37:19
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xiaoer0330

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励新虫应助！ 2013-04-11 17:19:57
显色之前是绿色，显色结束以后该是蓝色，我们的福林酚是Sigma的 其本身的颜色也是淡淡的荧光黄色
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2楼2013-04-11 11:19:34
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0203080204

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

样品得确定合适的稀释倍数，稀释倍数过高，看起来就不显色了。。
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3楼2013-04-12 09:15:06
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junmove

铜虫 (小有名气)
我最近也在做蛋白酶的活性，将前人做过的已知有活性的及自己的，测活性都测不出来。不知道什么原因
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4楼2013-04-26 15:58:53
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青青一麦

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by junmove at 2013-04-26 15:58:53
我最近也在做蛋白酶的活性，将前人做过的已知有活性的及自己的，测活性都测不出来。不知道什么原因

你测得是什么东西啊，我测得是真菌菌丝里面的，每次都是负值，即使偶尔出现个正值，也没有重复性，实在愁死我了
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快乐每天
5楼2013-04-26 21:14:50
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青青一麦

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 0203080204 at 2013-04-12 09:15:06
样品得确定合适的稀释倍数，稀释倍数过高，看起来就不显色了。。

我的样品直接没稀释，用原液测得，但是 如果如果将原液放置一定时间之后显色非常深，不知道怎么回事
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快乐每天
6楼2013-04-26 21:17:24
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木源

新虫 (初入文坛)
请问一下楼主乳酸和乳酸钠的称量国标上是称重再稀释定容，是直接用液体来称重量还是需要转化成体积呢？因为试剂都是液体。

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7楼2016-05-09 22:41:48
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