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wangyuanji

银虫 (小有名气)

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[求助] 伊文思蓝该如何检测？

准备检测伊文思蓝（百度：一种常用的偶氮染料制剂,因其分子量大小与血浆白蛋白相近，而且在血液中与血浆白蛋白有很高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪剂观察血脑屏障(BBB)的完整性）透过血脑屏障的量，从而考察药物对脑缺血引起的血脑屏障破坏的保护作用。经文献调研，发现多数此类文献均用紫外分光光度法检测（λ=600~630nm）。
样品处理方法如下：
脑缺血大鼠经尾静脉注入2% EB溶液(0.4 mL/l00g体重),1 h后用3.5%水合氯醛(1
mL/100 g)腹腔注射麻醉。麻醉大鼠用生理盐水约经左心室灌注,至右心耳流出液体为无色。取大脑,用刀片从中间矢状缝分为左右两部分,称重,分别浸入3 mL甲酰胺溶液中,于恒温箱中孵育48 h, 3000 rpm离心8 min,上清液于620 nm波长处测定OD值。以甲醜胺溶液为空白对照。
我是这样考虑的。血脑屏障被破坏后，在处死前静脉注入伊文思蓝，这种水溶性染料能够进入受损的脑组织，但是进入的量会很少，所以用紫外分光光度计检测可能灵敏度不够，所以我想用液相法检测，但是昨天进样试了一下；条件如下：PDA全波长检测，流动相甲醇-水（多种比例均试过了），柱温30度，迪马色谱柱（150*4.6mm，5.0μm），样品为水溶解的，直接进样的，没有经甲酰胺提取。一个小时的检测时间，都未见有峰出现。
大家帮忙分析一下，问题出在哪里了呢？

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