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就鉴别双歧杆菌
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哪位大侠做过用16S鉴别双歧杆菌啊？用细菌通用引物能做吗？谢谢！ |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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降落PCR（touchdown PCR），一种PCR技术，主要用于PCR的条件的优化。在许多情况下引物的设计使得PCR难以进行，例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR效率过低，但退火温度过低则会使非特异扩增过多。这虽然可以通过反复尝试来优化，但费时费力。降落PCR提供了一个较为简易的优化方法。其原理大致是这样的。首先在较高的温度下扩增，此时虽然扩增效率低，但非特异扩增基本没有。随着退火温度的降低，非特异扩增会逐步增多。但由于此时特异的扩增产物已经达到一定的数量优势，因此会对非特异扩增产生强烈的竞争抑制，从而大幅提高PCR的特异性和效率。这一PCR技术已经大量地进入医疗临床应用。现在，以高通量PCR为基础的检测方法、如人的 HLA分型 大多采用这一技术。 设计多循环反应的程序，以使相连循环的退火温度越来越低。由于开始时的退火温度选择为高于估计的Tm值，随着循环的进行，退火温度逐渐降到Tm值，并最终低于这个水平，用于确保第一个引物—模板杂交事件发生在最互补的反应物之间，即那些产生目的扩增产物的反应物之间。尽管退火温度最终会降到非特异杂交的Tm值，但此时目的扩增产物已开始几何扩增，在剩下的循环中处于超过任何滞后（非特异）PCR产物的地位。 说白了就是先提高退火温度，将目的片段扩增出来，然后逐渐降低退火温度，这样做的好处就是能够减少非特异性条带的扩增。 |
星星杨18楼2013-03-22 15:47:16
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星星杨(金币+1): 谢谢参与
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2楼2013-03-20 10:54:41
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我这几天在做16S双歧杆菌的鉴定，刚开始跑没条带，后来好不容易有了，可又好多条带，郁闷啊！可否帮我分析一下啊？谢谢啊！条件是： 94度 4分钟 94度 30秒 55度 30秒 72度 2分钟 30个循环 72度 10分钟 梯度PCR也做了，条带也很多，这么办啊？ |
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本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 2013.3.16.tif
2013-03-20 16:37:31, 646 K
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