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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 核酸染料GelRed对胶回PCR收产物是否有影响？为何TA克隆少且全是蓝斑
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micheal_your

新虫 (正式写手)

[交流] 核酸染料GelRed对胶回PCR收产物是否有影响？为何TA克隆少且全是蓝斑 已有5人参与

因实验室限制使用EB，本人采用核酸染料GelRed染色后，切胶回收PCR产物，然后采用Takara pmd 19-T simple vector试剂盒连接，严格按照说明书操作，感受态细胞为JM109（商品化）。蓝白斑筛选结果阴性对照没有菌落，阳性对照（试剂盒自带pUC19）均为白色菌落，但是实验平板上却全是蓝色菌落，不知道是否是由于采用GelRed染料原因，对TA克隆造成影响？求各位大侠赐教！
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1楼 2013-03-18 08:47:06
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aixia5

金虫 (小有名气)
★
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GelRed染料对PCR产物和酶切产物都没有影响。
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2楼2013-03-18 11:37:00
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yixinyuan

木虫 (正式写手)
★
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核酸染料倒不会影响PCR产物的回收，发生这种情况，多半是连接反应出问题的，建议排查一下实验过程。
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3楼2013-03-18 13:03:06
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micheal_your

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aixia5 at 2013-03-18 11:37:00
GelRed染料对PCR产物和酶切产物都没有影响。

问一下，你们实验室用哪种试剂盒回收GelRed染料染色的核酸片段？
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4楼2013-03-21 21:59:07
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★
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仿照qiagen的自己配的buffer
zymo的
都没问题
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5楼2013-03-21 22:09:21
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sega97

银虫 (小有名气)
★
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一般通用的染料对回收肯定没有影响的。
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[url=http://www.bio123.info]生物123网生物实验方法[/url]
6楼2013-03-21 22:20:20
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DoRbIr

金虫 (正式写手)
★
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说实话，感觉最近TaKaRa的产品有问题，我们实验室里最近无论是TaKaRa的内切酶，还是T载，都不好使了。我自己3月初做的，假阳性特别的高，顺便挑了几个白斑去测序，没有目的片段，都是插入了一个碱基。然后用他自带的control连，没连上还不长，载体自连的话，大部分都是白斑。
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7楼2013-03-22 02:46:29
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