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micheal_your

新虫 (正式写手)

[交流] 核酸染料GelRed对胶回PCR收产物是否有影响?为何TA克隆少且全是蓝斑 已有5人参与

因实验室限制使用EB,本人采用核酸染料GelRed染色后,切胶回收PCR产物,然后采用Takara pmd 19-T simple vector试剂盒连接,严格按照说明书操作,感受态细胞为JM109(商品化)。蓝白斑筛选结果阴性对照没有菌落,阳性对照(试剂盒自带pUC19)均为白色菌落,但是实验平板上却全是蓝色菌落,不知道是否是由于采用GelRed染料原因,对TA克隆造成影响?求各位大侠赐教!
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aixia5

金虫 (小有名气)


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GelRed染料对PCR产物和酶切产物都没有影响。
2楼2013-03-18 11:37:00
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yixinyuan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
核酸染料倒不会影响PCR产物的回收,发生这种情况,多半是连接反应出问题的,建议排查一下实验过程。
3楼2013-03-18 13:03:06
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micheal_your

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by aixia5 at 2013-03-18 11:37:00
GelRed染料对PCR产物和酶切产物都没有影响。

问一下,你们实验室用哪种试剂盒回收GelRed染料染色的核酸片段?
4楼2013-03-21 21:59:07
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)


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仿照qiagen的自己配的buffer
zymo的
都没问题
5楼2013-03-21 22:09:21
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sega97

银虫 (小有名气)


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一般通用的染料对回收肯定没有影响的。
[url=http://www.bio123.info]生物123网生物实验方法[/url]
6楼2013-03-21 22:20:20
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DoRbIr

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
说实话,感觉最近TaKaRa的产品有问题,我们实验室里最近无论是TaKaRa的内切酶,还是T载,都不好使了。我自己3月初做的,假阳性特别的高,顺便挑了几个白斑去测序,没有目的片段,都是插入了一个碱基。然后用他自带的control连,没连上还不长,载体自连的话,大部分都是白斑。
7楼2013-03-22 02:46:29
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