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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T-A克隆一直做不出来
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莓林塔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

纠结了我一个多月的TA克隆问题，事实上是我们的感受态只能转进去质粒，重组的载体就转不进去！！很奇怪，但这就是事实，换个商品化的感受态试试吧！反正各种可能都有的，你阳性对照分别做control insert和质粒的，同时试试！！
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21楼2013-06-02 22:16:26
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 南海所老龚 at 2013-03-19 08:41:45
做不出来原因很多，得一个个对照排除。我前段时间也是一直做不出来，琢磨了好久，后来发现是氨苄的问题。
我认为你可以从以下几个方面来分析：
1）PCR产物（楼上也指出是不是酶的问题，或者扩增其他片段做克隆，看 ...

楼主你怎么发现是氨苄的问题啊？求解
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船到桥头自然直
22楼2013-06-03 13:39:01
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窝窝头

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换平板，换载体再试。
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23楼2013-06-03 16:48:12
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南海所老龚

新虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 冰风颤木 at 2013-06-03 13:39:01
楼主你怎么发现是氨苄的问题啊？求解...

这就需要时间和耐心，一一排除了。
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TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
24楼2013-06-04 08:54:18
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

得看酶是不是高保真的，高保真的酶PCR反应后3·没有A尾，就连接不上。需要加尾反应
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坚持不懈,终会成功!
25楼2013-06-04 23:11:24
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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by j2 at 2013-03-18 09:02:48
用的什么酶扩增的？高保增需要加A的

什么意思？怎么加A啊
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26楼2013-07-30 10:49:44
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

天啊，TA克隆是最好做的，一般一做，挑四个，至少3个都是阳性那种。我直接做载体连接，基本都是一次性就成功了。周期三四天吧，总结了一下，水酶神马的，最好都是自己用，不要和人混用，哪里出问题了都不知道！
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27楼2013-07-30 11:06:38
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
21楼: Originally posted by 莓林塔 at 2013-06-02 22:16:26
纠结了我一个多月的TA克隆问题，事实上是我们的感受态只能转进去质粒，重组的载体就转不进去！！很奇怪，但这就是事实，换个商品化的感受态试试吧！反正各种可能都有的，你阳性对照分别做control insert和质粒的，同 ...

事实上，是连接效率不够，我买的感受态转质粒那是满板，转连接产物只长一个，幸好是阳性，但是我换了一个连接酶，同样条件就长了十多个
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28楼2013-07-30 11:09:09
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maidi12

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
29楼2013-07-31 11:28:37
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