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莓林塔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

纠结了我一个多月的TA克隆问题,事实上是我们的感受态只能转进去质粒,重组的载体就转不进去!!很奇怪,但这就是事实,换个商品化的感受态试试吧!反正各种可能都有的,你阳性对照分别做control insert和质粒的,同时试试!!
21楼2013-06-02 22:16:26
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 南海所老龚 at 2013-03-19 08:41:45
做不出来原因很多,得一个个对照排除。我前段时间也是一直做不出来,琢磨了好久,后来发现是氨苄的问题。
我认为你可以从以下几个方面来分析:
1)PCR产物(楼上也指出是不是酶的问题,或者扩增其他片段做克隆,看 ...

楼主你怎么发现是氨苄的问题啊?求解
船到桥头自然直
22楼2013-06-03 13:39:01
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窝窝头

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换平板,换载体再试。
23楼2013-06-03 16:48:12
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 冰风颤木 at 2013-06-03 13:39:01
楼主你怎么发现是氨苄的问题啊?求解...

这就需要时间和耐心,一一排除了。
TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
24楼2013-06-04 08:54:18
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

得看酶是不是高保真的,高保真的酶PCR反应后3·没有A尾,就连接不上。需要加尾反应
坚持不懈,终会成功!
25楼2013-06-04 23:11:24
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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by j2 at 2013-03-18 09:02:48
用的什么酶扩增的?高保增需要加A的

什么意思?怎么加A啊
26楼2013-07-30 10:49:44
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

天啊,TA克隆是最好做的,一般一做,挑四个,至少3个都是阳性那种。我直接做载体连接,基本都是一次性就成功了。周期三四天吧,总结了一下,水酶神马的,最好都是自己用,不要和人混用,哪里出问题了都不知道!
27楼2013-07-30 11:06:38
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
21楼: Originally posted by 莓林塔 at 2013-06-02 22:16:26
纠结了我一个多月的TA克隆问题,事实上是我们的感受态只能转进去质粒,重组的载体就转不进去!!很奇怪,但这就是事实,换个商品化的感受态试试吧!反正各种可能都有的,你阳性对照分别做control insert和质粒的,同 ...

事实上,是连接效率不够,我买的感受态转质粒那是满板,转连接产物只长一个,幸好是阳性,但是我换了一个连接酶,同样条件就长了十多个
28楼2013-07-30 11:09:09
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maidi12

禁虫 (小有名气)

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29楼2013-07-31 11:28:37
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